《CD31陽(yáng)性及陰性循環(huán)異倍體腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法中關(guān)村團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)》正式發(fā)布

隨著原位、聯(lián)合檢測(cè)異倍體CD31+ 腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞及CD31- 腫瘤細(xì)胞的不斷普及，為確保不同醫(yī)療單位按照相同的嚴(yán)格技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)開(kāi)展該類檢測(cè)以高質(zhì)量滿足臨床需求，最近，北京大學(xué)人民醫(yī)院、北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院、北京協(xié)和醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)腫瘤醫(yī)院、四川大學(xué)華西醫(yī)院、及賽特生物作為發(fā)起、牽頭單位，在前期共同編寫(xiě)了由“中國(guó)研究型醫(yī)院學(xué)會(huì)”發(fā)布的相關(guān)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn) (T/CRHA 163-2025) 基礎(chǔ)上，又進(jìn)一步聯(lián)合國(guó)內(nèi)近40家著名醫(yī)學(xué)院校及相關(guān)單位，包括國(guó)家衛(wèi)健委科學(xué)技術(shù)研究所、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所、北京醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)一附院、清華大學(xué)長(zhǎng)庚醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)多家附屬醫(yī)院、浙江省腫瘤醫(yī)院、江蘇省人民醫(yī)院、復(fù)旦臨床病理診斷中心、寧波臨床病理診斷中心等多個(gè)單位 (詳見(jiàn)下述參編單位名單)，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 1.1-2020的嚴(yán)格要求，制定了經(jīng)中關(guān)村標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)認(rèn)證的、更加完善的《CD31陽(yáng)性及陰性循環(huán)異倍體腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn) (T/ZSA 320-2025)。此團(tuán)標(biāo)剛剛在國(guó)家“全國(guó)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)信息化平臺(tái)”上正式發(fā)布 (https://www.ttbz.org.cn/StandardManage/Detail/154433/)。

“標(biāo)準(zhǔn)”是國(guó)家經(jīng)濟(jì)活動(dòng)和社會(huì)發(fā)展的重要技術(shù)支撐，也是國(guó)家基礎(chǔ)性制度的重要方面。為此，中共中央、國(guó)務(wù)院2021年10月發(fā)布了《國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展綱要》以大力發(fā)展團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)施團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)培優(yōu)計(jì)劃，充分發(fā)揮技術(shù)優(yōu)勢(shì)企業(yè)的作用，引導(dǎo)制定原創(chuàng)性、高質(zhì)量團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn), 并推進(jìn)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的普及應(yīng)用，這已成為國(guó)家今后的既定方針與政策。

與以往報(bào)道過(guò)的介紹各種CTC檢測(cè)方法臨床應(yīng)用的專家共識(shí)不同，《CD31陽(yáng)性及陰性循環(huán)異倍體腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法》中關(guān)村團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)是由國(guó)內(nèi)多家頂級(jí)、一流醫(yī)學(xué)院校的多位著名專家在共識(shí)的基礎(chǔ)上，針對(duì)如何規(guī)范性使用原創(chuàng)性、擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)以有效區(qū)分、原位聯(lián)合檢測(cè)泛瘤種樣本中表達(dá)了多種腫瘤標(biāo)志物的CD31- 腫瘤細(xì)胞、CD31+ 腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞、以及它們的相關(guān)臨床實(shí)用性而共同制定的。該團(tuán)標(biāo)制定過(guò)程中，國(guó)家衛(wèi)健委科學(xué)技術(shù)研究所承擔(dān)的中關(guān)村標(biāo)委會(huì)醫(yī)工融合分技術(shù)委員會(huì)嚴(yán)格把關(guān)，在其專家組指導(dǎo)下匯集多方寶貴意見(jiàn)與建議，草案幾經(jīng)修改，最終通過(guò)了由多位院士、著名專家組成的評(píng)審委員會(huì)的嚴(yán)格審評(píng)，形成相關(guān)檢測(cè)的中關(guān)村團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。

中關(guān)村標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)于 2016 年在國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局、工業(yè)和信息化部、北京市市場(chǎng)監(jiān)督管理局、北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)、中關(guān)村科技園區(qū)管理委員會(huì)指導(dǎo)與有力支持下在北京成立。該標(biāo)協(xié)承擔(dān)認(rèn)證以創(chuàng)新技術(shù)為核心的技術(shù)類團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，是公認(rèn)的國(guó)內(nèi)及國(guó)際一流專業(yè)性團(tuán)標(biāo)。此次中關(guān)村團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布，為全國(guó)不同地區(qū)醫(yī)院規(guī)范性開(kāi)展相關(guān)檢測(cè)及臨床應(yīng)用提供了有力保障。

相關(guān)技術(shù)及應(yīng)用介紹

一、 i?FISH? 腫瘤組織與液體雙相活檢：原位同步檢測(cè)、亞類分型腫瘤組織中的TC、TEC及生物體液中的CTC、CTEC

腫瘤組織中的 CD31- 染色體異倍體腫瘤細(xì)胞 (TC, Tumor Cell)、CD31+ 染色體異倍體腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞 (TEC, Tumor Endothelial Cell)，以及它們?cè)谕庵苎械拇嬖谛问?- 循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC、及首次報(bào)道的循環(huán)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞CTEC (Lin et al. 2017 Sci Rep 7:9789)，在腫瘤發(fā)生、腫瘤血管生成、腫瘤免疫、構(gòu)成腫瘤微環(huán)境、及腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、治療耐受等方面各自具有特殊但相互關(guān)聯(lián)的重要作用。

賽特生物 (www.cytointelligen.com) 與國(guó)內(nèi)外多家醫(yī)學(xué)院校密切合作，在全球首次聯(lián)合開(kāi)發(fā)出獨(dú)特的“多重腫瘤標(biāo)志物蛋白免疫熒光染色-染色體熒光原位雜交” (i?FISH) 整合技術(shù)。該原創(chuàng)性技術(shù)首次實(shí)現(xiàn)了針對(duì)細(xì)胞的核心三要素 (核酸、蛋白、細(xì)胞形態(tài)) 進(jìn)行同步、原位、聯(lián)合檢測(cè)。自《科學(xué)》雜志2013年首次報(bào)道了i?FISH技術(shù) (Life Sci Tech Sect, Science 341(2013))、后又經(jīng)國(guó)際著名專業(yè)雜志《分子腫瘤學(xué)》于2021年特別以封面形式對(duì)此技術(shù)作了進(jìn)一步專題報(bào)道以來(lái) (Zhang et al. 2021 Mol Oncol 18:2891)，一系列涵蓋多瘤種的大樣本臨床研究與臨床應(yīng)用證實(shí)，與常規(guī)病理學(xué)檢查冰凍或石蠟包埋斷層切片樣本中的非完整細(xì)胞不同 (切片中的非完整細(xì)胞不再含有完整的染色體倍體數(shù)目)，適于腫瘤組織與液體活檢的“雙相i?FISH”作為精準(zhǔn)分子診斷的重要手段，能夠有效檢測(cè)實(shí)體瘤腫瘤組織、癌變手術(shù)切緣、淋巴結(jié)、宮頸刮片、外周血、惡性胸腹水、骨髓、尿液、腦脊液等各種臨床樣本中的完整TC、TEC、CTC、CTEC，分離出的受檢細(xì)胞具有無(wú)損的細(xì)胞形態(tài)以及俱全的染色體倍體數(shù)目。

賽特生物與江豐生物信息科技公司聯(lián)合開(kāi)發(fā)的“i?FISH全自動(dòng)高通量6-通道熒光3D圖像掃描與AI分析系統(tǒng)”可以準(zhǔn)確識(shí)別、精確定量分析同步檢測(cè)出的i?FISH細(xì)胞一系列綜合性指標(biāo)，包括染色體異倍體數(shù)目、位于細(xì)胞核、細(xì)胞漿、或細(xì)胞膜上的多重腫瘤標(biāo)志物蛋白及CD31的表達(dá)狀態(tài)、與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的不同細(xì)胞形態(tài) (大小、細(xì)胞團(tuán)癌栓) 、與藥敏或耐藥相對(duì)應(yīng)的細(xì)胞壞死或活性狀態(tài)等 (Lin et al. 2021 Cancers 13:5108)，據(jù)此可將細(xì)胞進(jìn)行亞類分型，并一鍵自動(dòng)生成包括各種亞類細(xì)胞的詳盡統(tǒng)計(jì)分析報(bào)告。

現(xiàn)已證實(shí)i?FISH檢測(cè)出的各種亞類細(xì)胞分別具有各自不同的重要臨床意義：例如乳腺癌肺轉(zhuǎn)移過(guò)程中，唯有EpCAM+ 的三倍體及多倍體小細(xì)胞這一特殊亞類CTC起著決定性作用并與患者總生存率 (OS) 下降密切相關(guān) (Liu et al. 2019 Sci Adv 5:eaav4275)；胃癌三倍體CTC對(duì)一線化療藥物順鉑內(nèi)源性耐藥；腫瘤組織HER2- 的胃癌病人一旦伴有動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的HER2+ CTC檢出時(shí)，患者使用抗HER2治療獲益 (Li et al. 2018 Clin Cancer Res 24:5191) (該重要成果也在國(guó)外隨后發(fā)表的乳腺癌III期臨床實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí))；非小細(xì)胞肺癌NSCLC患者外周血中的PD-L1+/CD31- CTC可被O藥致敏的T細(xì)胞殺傷，而多倍體PD-L1+/CD31+ CTEC則與腫瘤組織中的TEC相似，對(duì)致敏的T細(xì)胞耐受且與患者不良預(yù)后密切相關(guān) (Zhang et al. 2020 Cancer Lett 469:355)；抗腫瘤血管生成藥物貝伐單抗治療NSCLC過(guò)程中，以往人們經(jīng)常使用正常二倍體CD31+“循環(huán)血管內(nèi)皮細(xì)胞 CEC (circulating endothelial cell)”評(píng)估療效，但這類廣泛存在于人體內(nèi)的正常CEC可相互干擾并由此導(dǎo)致矛盾性的結(jié)論，而異倍體CTEC已被證實(shí)能更加準(zhǔn)確、可靠地實(shí)時(shí)評(píng)估療效，尤其陽(yáng)性檢出裸細(xì)胞型 (EpCAM-/Vimentin-) CD31+ CTEC 時(shí)預(yù)示療效較佳 (Zhang et al. 2021 Mol Oncol 18:2891)；宮頸刮片篩查過(guò)程中陽(yáng)性檢出Ki67+/p16+/CD31- 三倍體腫瘤細(xì)胞TC，對(duì)高靈敏、高特異診斷因感染不同型別HPV所致宮頸瘤變具有重要的臨床意義 (Wang et al. 2025 BMC Cancer 25:945)。此外，國(guó)家癌癥中心赫捷院士院長(zhǎng)、301醫(yī)院/清華長(zhǎng)庚醫(yī)院董家鴻院士院長(zhǎng)團(tuán)隊(duì)也分別報(bào)道了利用i?FISH有效區(qū)分、聯(lián)合檢測(cè)CD31- CTC及CD31+ CTEC在肺癌早診、早篩及肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)過(guò)程中的重要作用 (Lei et al. 2020 Clin Transl Med e128; Wang et al. 2018 Cancer Lett 312:99)。

“i?FISH腫瘤組織定量活檢” 的一系列最新臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)，相當(dāng)一些包括多瘤種、接受手術(shù)治療的腫瘤患者，其以往公認(rèn)的“安全性手術(shù)切緣”實(shí)則并不一定安全，切緣部位經(jīng)常富含具有正常細(xì)胞形態(tài)、常規(guī)病理學(xué)檢查無(wú)法有效識(shí)別的染色體異倍體“癌變細(xì)胞 (cancerized cell)”(Curtius et al. 2018 Nat Rev Cancer 18:19)，包括CD31- TC及CD31+ TEC，從而構(gòu)成可能與術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)的“區(qū)域性癌變切緣”(field cancerized excision margin) (Fu et al. 2024 Cancer Lett 598:217099)，這為今后如何更加客觀、準(zhǔn)確地界定安全性手術(shù)切緣，以及如何根據(jù)術(shù)后切緣部位殘留的i?FISH TC、TEC細(xì)胞密度 (TC或TEC數(shù)目/受檢細(xì)胞總數(shù)，?) 以有效指導(dǎo)術(shù)后個(gè)體化輔助治療 (如放、化療、靶向、免疫治療等) ，提供了可靠技術(shù)保障，具有極大的臨床研究與實(shí)用價(jià)值。

二、 i?FISH? 精準(zhǔn)單細(xì)胞多組學(xué)分析

目前常規(guī)開(kāi)展的單細(xì)胞分析主要是針對(duì)細(xì)胞混合群體中的各個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序，但測(cè)序前對(duì)每個(gè)待測(cè)靶細(xì)胞的生物學(xué)性狀及臨床意義并不充分了解，甚至完全不了解，因此這種單細(xì)胞測(cè)序方法亦被喻為 “高通量盲測(cè)”。

與之不同，i?FISH首先檢測(cè)出腫瘤組織或生物體液中具有不同臨床意義的各種亞類細(xì)胞，研究人員再依據(jù)不同研究目的，確定與轉(zhuǎn)移、耐藥、MRD等分別相關(guān)的待測(cè)細(xì)胞類別 ，繼而在排除其它所有不相關(guān)細(xì)胞干擾的前提下，有針對(duì)性地利用賽特“單細(xì)胞非激光顯微分離系統(tǒng) (n-MSM)”逐個(gè)分別挑取由3D掃描系統(tǒng)鎖定了坐標(biāo)的完整i?FISH靶細(xì)胞，以便有的放矢地開(kāi)展后續(xù)精準(zhǔn)單細(xì)胞多組學(xué)分析。賽特生物n-MSM單細(xì)胞挑選系統(tǒng)避免使用激光切割細(xì)胞及回收細(xì)胞碎片的LCM方法，從而確保挑取單細(xì)胞過(guò)程中不丟失任何細(xì)胞組分。此外，與LCM不同，該系統(tǒng)亦可在液態(tài)體系中挑取完整單細(xì)胞供mRNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析。

以上圖為例，利用新開(kāi)發(fā)的i?FISH(NC) (Lin et al. 2021 Cancers 13:5108) 在接受治療的NSCLC患者體內(nèi)檢測(cè)出各種壞死 (NC, necrotic) 或活性 (viable)、 表達(dá)了PD-L1的異倍體CD31- CTC及CD31+ CTEC亞類細(xì)胞，針對(duì)這些細(xì)胞開(kāi)展的“比對(duì)性精準(zhǔn)單細(xì)胞全外顯子測(cè)序”(Precision scWES) 分析顯示，只在對(duì)治療敏感的單個(gè)“壞死”CTC、CTEC亞類細(xì)胞中分別檢測(cè)出與不同治療藥物相關(guān)的突變基因，而對(duì)治療耐受的“活性”CTC、CTEC則沒(méi)有顯示與治療藥物相關(guān)的基因突變，從而避免了混合盲測(cè)單細(xì)胞時(shí)可能帶來(lái)的混淆、誤判不同亞類單細(xì)胞的生物學(xué)功能及臨床意義。

雙相i?FISH腫瘤組織與液體活檢 (Fu et al. 2024 Cancer Lett 598:217099)，結(jié)合精準(zhǔn)單細(xì)胞全基因組測(cè)序、單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)等一系列多組學(xué)分析手段，將使人們能夠在腫瘤不斷動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程中不再局限于機(jī)體某一單一部位，而是有助于從點(diǎn)到面地從固態(tài)組織樣本到液態(tài)生物體液等方面全方位了解、揭示腫瘤原發(fā)灶、區(qū)域性癌變切緣、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、外周血等生物體液、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移灶中的TC、TEC、CTC、CTEC等各種細(xì)胞如何在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、耐藥、MRD、復(fù)發(fā)、以及構(gòu)成腫瘤微環(huán)境等過(guò)程中相互衍變、相互關(guān)聯(lián)、及相互作用，從而在即將到來(lái)的CTC、CTEC 2.0時(shí)代 (Dai et al. 2025 Cancer Cell 43:1399) 助力腫瘤預(yù)防、診斷與個(gè)體化精準(zhǔn)治療。

中關(guān)村團(tuán)標(biāo)參編單位：

1. 北京大學(xué)人民醫(yī)院

2. 北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院

3. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院

4. 復(fù)旦大學(xué)腫瘤醫(yī)院

5. 四川大學(xué)華西醫(yī)院

6. 北京醫(yī)院

7. 泰州賽特生物醫(yī)藥科技有限公司

8. 國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)科學(xué)技術(shù)研究所

9. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院

10. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 (北京)

11. 清華大學(xué)附屬北京清華長(zhǎng)庚醫(yī)院

12. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院

13. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院

14. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院

15. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院

16. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院

17. 北京大學(xué)首鋼醫(yī)院

18. 北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院內(nèi)蒙古醫(yī)院

19. 中日友好醫(yī)院 (北京)

20. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院 (北京)

21. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院 (北京)

22. 海軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院

23. 中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院

24. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海市第一人民醫(yī)院

25. 浙江省腫瘤醫(yī)院

26. 江蘇省人民醫(yī)院

27. 南方醫(yī)科大學(xué)皮膚病醫(yī)院

28. 天津市第一中心醫(yī)院

29. 山東第一醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院

30. 西安國(guó)際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院

31. 上海復(fù)旦臨床病理診斷中心

32. 寧波市臨床病理診斷中心

33. 江蘇省蘇北人民醫(yī)院

34. 宜昌市中心人民醫(yī)院

35. 寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院

36. 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院

37. 杭州市第三人民醫(yī)院

38. 江蘇蘇州明基醫(yī)院

39. 寧波江豐生物信息技術(shù)有限公司

40. 中關(guān)村標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì) (北京)

原文下載：http://www.cytointelligen.com/zlwz，第78R2篇文獻(xiàn)