動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)手冊(cè)丨條件性位置厭惡實(shí)驗(yàn)測(cè)試方法及注意事項(xiàng)

條件性位置厭惡實(shí)驗(yàn)（Conditioned Place Aversion, CPA）是條件性位置偏好（CPP）的反向范式，用于評(píng)估動(dòng)物對(duì)厭惡刺激（如疼痛、戒斷反應(yīng)、惡心或電擊）所形成的情境性回避學(xué)習(xí)。該方法廣泛應(yīng)用于研究藥物戒斷、內(nèi)臟不適、疼痛相關(guān)情緒以及抗厭惡/抗焦慮干預(yù)的效果。

CPA基于經(jīng)典條件反射：將某一特定環(huán)境線索（如特定圖案、質(zhì)地的隔室）與非條件性厭惡刺激（Unconditioned Stimulus, US）反復(fù)配對(duì)；動(dòng)物逐漸將該環(huán)境與負(fù)面體驗(yàn)關(guān)聯(lián)，在后續(xù)自由選擇測(cè)試中主動(dòng)回避該區(qū)域，表現(xiàn)為在配對(duì)側(cè)停留時(shí)間顯著減少。

Fig1 條件性位置厭惡試驗(yàn)箱

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 前測(cè)階段（Pre-test）

小鼠自由探索整個(gè)裝置（通常15–30分鐘）；

記錄其在各隔室的基線停留時(shí)間，排除先天偏好。

2. 條件化訓(xùn)練階段（Conditioning）

交替日配對(duì)設(shè)計(jì)（最常用）：

厭惡刺激日：注射/給予厭惡刺激（如鋰鹽、嗎啡戒斷劑、足底電擊等）→ 放入A側(cè)室，限制活動(dòng)30–45分鐘；

對(duì)照日：注射生理鹽水或無(wú)處理 → 放入B側(cè)室，同樣限制活動(dòng)；

重復(fù)2–4個(gè)循環(huán)（如2天厭惡 + 2天對(duì)照）。

關(guān)鍵：厭惡刺激需在其效應(yīng)高峰期與環(huán)境暴露同步。

3. 后測(cè)階段（Test）

動(dòng)物不接受任何處理，自由探索整個(gè)裝置；

記錄在厭惡刺激配對(duì)側(cè)的停留時(shí)間；

陽(yáng)性結(jié)果：停留時(shí)間顯著短于前測(cè)或?qū)φ战M → 表明形成位置厭惡。

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評(píng)估參數(shù)

厭惡分?jǐn)?shù) =（對(duì)照側(cè)時(shí)間-厭惡側(cè)時(shí)間）/總時(shí)間

Δ停留時(shí)間 = 后測(cè)厭惡側(cè)時(shí)間-前測(cè)厭惡側(cè)時(shí)間（應(yīng)為負(fù)值）

穿梭次數(shù)：評(píng)估一般活動(dòng)性，排除運(yùn)動(dòng)抑制干擾

案例簡(jiǎn)要解析

Fig2 在充滿水的環(huán)境中進(jìn)行位置條件化可誘導(dǎo)CPA

基線測(cè)試（Baseline Test）：小鼠在無(wú)處理狀態(tài)下自由探索由兩個(gè)隔室組成的裝置，記錄其對(duì)兩側(cè)的初始偏好。

條件化訓(xùn)練（Conditioning）：在“水配對(duì)日”，小鼠被置于一個(gè)原本干燥的隔室中，隨后該隔室逐漸被注水淹沒(méi)（實(shí)驗(yàn)2）；而在間隔日，小鼠被放入對(duì)側(cè)隔室，該隔室在整個(gè)試驗(yàn)期間保持干燥。此過(guò)程重復(fù)3次，建立“水環(huán)境 = 不適”的關(guān)聯(lián)。

位置厭惡測(cè)試：完成3次配對(duì)后，小鼠再次自由探索整個(gè)裝置（此時(shí)水配對(duì)側(cè)已預(yù)先注滿水），評(píng)估其環(huán)境選擇行為。

(b) 位置厭惡評(píng)分：

以小鼠在水配對(duì)隔室中停留時(shí)間的百分比表示。結(jié)果顯示，在30分鐘的完整測(cè)試中，小鼠在測(cè)試階段顯著減少在注水隔室的停留時(shí)間（與基線相比），表明形成了強(qiáng)烈的CPA。

(c) 測(cè)試階段的時(shí)間動(dòng)態(tài)分析：

將30分鐘的偏好測(cè)試按每5分鐘分段分析，進(jìn)一步揭示小鼠從測(cè)試初期即表現(xiàn)出對(duì)注水隔室的持續(xù)回避且該回避行為在整個(gè)測(cè)試期間保持穩(wěn)定。

注意事項(xiàng)

刺激強(qiáng)度需優(yōu)化：過(guò)弱無(wú)法建立厭惡，過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致僵直或不動(dòng)，影響空間選擇。

平衡配對(duì)設(shè)計(jì)：一半動(dòng)物將A室與厭惡配對(duì)，另一半配對(duì)B室，消除環(huán)境偏好偏差。

排除非特異性效應(yīng)：如鋰鹽可能引起低活動(dòng)性，需結(jié)合曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證是否為真實(shí)“回避”而非“不能移動(dòng)”。

時(shí)間窗口敏感：厭惡刺激（如戒斷）需在其主觀不適高峰期進(jìn)行配對(duì)。

文獻(xiàn)引用：

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• avier Navarro-Zaragoza, E. Martínez-Laorden, F. Javier Teruel-Fernández, Victoria Gómez-Murcia, Alberto Cánovas, María-Victoria Milanés, María-Luisa Laorden, Pilar Almela,

• Naloxone-induced conditioned place aversion score and extinction period are higher in C57BL/6J morphine-dependent mice than in Swiss: Role of HPA axis,Pharmacology Biochemistry and Behavior,Volume 201,2021,173106,ISSN 0091-3057,https://doi.org/10.1016/j.pbb.2021.173106.

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