WB 不用 GAPDH、β-actin，結果更可靠？原來高分 SCI 早這樣干了

師弟

WB 要不跑不齊，要不結果重復性差！555

師弟

樣本和抗體馬上就要沒有了，就連 beta-actin 都讓我用完一管了！

emmm.... 其實跑 WB 不用管家蛋白做內參，或許更精準～

師姐

師弟

不用內參？這怎么可能呢？老板不要罵死我！

我的意思是不用管家蛋白，內參還是要有的，不然怎么證明上樣量是齊的？

師姐

你了解一下 Stain-Free 技術吧，它是一種無需傳統(tǒng)染色和內參的 WB 技術，通過直接檢測總蛋白的熒光信號來定量分析目標蛋白，最近隔壁實驗室都改做 Stain-Free 了，還發(fā)了高分 SCI ，并且也是抑郁課題的研究，你來學學看，現在還有機會免費試用（點擊此處申請試用）。

師姐

無需管家內參，結果更可靠？

無需管家內參，結果可靠有趨勢

在傳統(tǒng)的 WB 實驗中，管家蛋白（如 GAPDH、β-actin 等）是必不可少的，用于校正樣本之間的差異，從而更準確地反映目標蛋白的表達水平。然而，內參蛋白的表達可能會受到實驗條件的影響，導致其表達水平不穩(wěn)定。例如，在不同的處理組中，內參蛋白的表達可能會因為細胞狀態(tài)、處理時間等因素而發(fā)生變化，從而影響實驗結果的準確性。

而在【A Walnut-Derived Peptide WSPSGR Alleviates Depressive-Like Behaviors in Mice via IDO1 Inhibition and Gut Microbiota–Tryptophan Axis Modulation】這一論文中 [1]，研究人員使用了 Stain-Free 總蛋白染色技術替代傳統(tǒng)內參，快速、準確地測定每個泳道中的總蛋白量，從而為后續(xù)的 Western Blot 分析提供標準化的參考（圖 1）。這種方法不僅簡化了實驗步驟，還提高了結果的可靠性。

圖 1 Stain-Free 定量總蛋白（左圖），協(xié)助檢測結腸和腦組織中 IDO1 蛋白的表達（右圖）

操作簡便，縮短實驗周期

傳統(tǒng)的 WB 實驗步驟繁瑣，包括樣本處理、蛋白提取、SDS - PAGE 電泳、轉膜、封閉、一抗和二抗孵育、顯色等多個步驟。每個步驟都需要嚴格控制條件，稍有不慎就可能導致實驗失敗。此外，傳統(tǒng)的染色不僅耗時，還可能帶來誤差。

在論文中，研究人員使用了 Stain-Free 技術簡化了實驗步驟。具體方法如下：

Stain-Free 免染 Western 與傳統(tǒng) Western 實驗流程對比表

總的來說，Stain-Free 免染 Western 實驗流程以 TGX Stain-Free 免染膠為核心，通過 15 分鐘電泳、最快 3 分鐘轉印實現蛋白快速分離與轉移，無需染色 / 脫色，可全程評估實驗質量，電泳后 1 分鐘激發(fā)即可獲取總蛋白信號，結合 Image Lab 軟件自動完成總蛋白歸一化定量，縮短實驗時長并提升結果準確性。

20 μg 蛋白即可檢測，靈敏度高

Stain-Free 技術的一個顯著優(yōu)勢是其高靈敏度和良好的重復性。在論文中，研究人員上樣量僅為 20 μg 蛋白。這種低上樣量不僅減少了蛋白的使用量，還提高了檢測的靈敏度。實驗結果重復性非常好，多次實驗結果高度一致。

傳統(tǒng) Western Blot：通常需要20～50 μg的蛋白樣本，具體量取決于目標蛋白的豐度和抗體的靈敏度。在一些情況下，可能需要50～100 μg或更高。

Stain-free 技術：在論文中，Stain-free 技術的上樣量為20 μg，這與傳統(tǒng)方法中的高靈敏度實驗相當。Stain-free 技術通過提高靈敏度和重復性，使得在較低的上樣量下也能獲得可靠的結果。

此外，由于實驗步驟的簡化，也減少了試劑的使用量，從而節(jié)省了實驗經費。

師弟

原來如此，那我也可以參考這篇論文中的方法，將 Stain-Free 技術設計到我的研究中？

沒錯，你現在做的抑郁相關蛋白，比如小窩蛋白（Caveolin-1）和神經生長因子受體（p75NTR），都可以通過 Stain-Free 技術來定量總蛋白，結果更準一些。

師姐

師弟

對哦！尤其是 Caveolin-1 ，我跑了 5 次，每次趨勢都不一樣！

Stain-Free 技術的靈敏度高，實驗流程又快捷，而且不需要內參，直接通過總蛋白的灰度值進行校正，避免了內參表達不穩(wěn)定的問題，結果更可靠哦～

師姐

省時省錢：WB 結果雙保險

Stain-Free 免染總蛋白技術利用含有專有三鹵化合物的聚丙烯酰胺凝膠，在電泳結束后，僅需 1 分鐘的紫外光激發(fā)，即可在凝膠中觀察到總蛋白的熒光信號，實現蛋白定量和歸一化分析，從而避免了傳統(tǒng)方法中使用單一管家蛋白（如 GAPDH、β-actin）作為內參的局限性。

其核心優(yōu)勢包括：

1

操作簡便快捷，無需額外染色步驟，節(jié)省時間和試劑成本。

2

可直接評估總蛋白量，確保上樣量一致。

3

提供更全面、準確的蛋白質定量結果，提高實驗可靠性。

綜上，為了幫大家避免 WB 實驗內參不準帶來時間與經費上的浪費，我們特意準備了 Stain-Free 免費申請試用以及全套免染 Western 實驗流程，請點擊下方小程序碼，立即獲取吧！

注：

1. 相關產品僅限科研使用，不作為臨床診斷。

2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Inc. 在特定區(qū)域的商標。

3. 本活動的最終解釋權歸伯樂生命醫(yī)學產品（上海）有限公司。

內容策劃：沈佳鈺

內容審核：周育紅

題圖來源：文獻截圖[1]

參考文獻：

[1]. Xiao X, Ma A, Chen Z, Li S, Xia J, Ding S, Jia Y. A Walnut-Derived Peptide WSPSGR Alleviates Depressive-Like Behaviors in Mice via IDO1 Inhibition and Gut Microbiota-Tryptophan Axis Modulation. J Agric Food Chem. 2025 Oct 22;73(42):26780-26792. doi: 10.1021/acs.jafc.5c09940. Epub 2025 Oct 11. PMID: 41074849.