師兄純化蛋白的不二法門，竟是在實驗室修「無情道」？

第一章

師兄手中的移液器正上下翻飛，他需要從混沌懸液中提取項目的命根子——目標蛋白。師兄素有蛋白純化神來之手的美譽，總被有心之人覬覦：

假笑師妹

師兄，你的這批樣品我也想用，幫我提個蛋白唄？

-話音未落，蹭料師姐的手已伸到眼前-

洗滌緩沖液江湖救急，借我使使！

蹭料師姐

-急性子博后直接將他的粗提液懟了過來-

急性子博后

兄臺，先幫我提一個試試，你的樣品先放冰箱！

第二章

「三面夾擊」下，師兄嘴角微揚，手中的移液器劃出一道優雅的弧線，祭出破局之法：

師兄

「選擇性耳背」——對周遭的無禮請求自動屏蔽，眼中只有離心管中那片微觀宇宙。

師兄

「鐵手結界」——起身護住關鍵試劑，口中輕念護身咒語：「退！退！退！」，手上步驟卻行云流水，絲毫不亂。

第三章

師兄已優雅地將澄澈的純蛋白液收入管中，雜蛋白在廢液缸里發出無聲哀嚎，他轉向我，眉梢一挑：

師兄

要點可都記下了？

-我自信滿滿-

蛋白純化的核心就是學會拒絕，保持專注。

-師兄一個趔趄，差點摔了樣本-

師兄

秘訣是讓你用親和純化磁珠法純化！它的簡便和高效，才是真法寶啊！

與傳統的蛋白質純化方法相比，親和純化磁珠作為一種高效、便捷的工具，正在逐漸成為實驗室的首選。如果您正在進行蛋白純化實驗，或者有蛋白純化需求，即日起至 2025 年 10 月 28 日，可識別下方二維碼，花 2 分鐘參與純化磁珠有獎問卷填寫，有機會獲得文件袋或定制筆記本！

師兄小課堂

親和磁珠純化具有以下優勢顯著的優勢

操作簡便：磁珠的磁性特性使得分離與回收過程變得簡單高效，減少了實驗操作的復雜性和時間消耗。

可擴展性：無論是小規模實驗還是高通量篩選，親和純化磁珠都能輕松應對，滿足不同實驗需求。

兼容性強：適用于多種樣本類型，包括細胞裂解液、血清和組織提取液，廣泛應用于基礎研究、藥物開發和臨床診斷等領域。

親和純化磁珠法純化蛋白有五個關鍵要點

充分重懸：磁珠靜置后會沉降，取用前必須通過渦旋使其成為均勻的懸液。

溫和混勻：在整個結合和洗滌過程中，要通過輕柔的翻轉或吹打來混勻磁珠與液體。避免使用渦旋損傷蛋白或磁珠。

完全分離：將管子置于磁力架上后，務必靜置等待溶液完全變清澈，確保所有磁珠都被磁性吸附到位后。

小心移液：分離后，使用移液器小心地吸棄上清液，槍頭應遠離聚集的磁珠。切勿采用傾倒的方式。

保持濕潤：在整個操作過程中，絕對不能讓磁珠干燥。一旦磁珠變干，會極大地增加非特異性吸附。

通過使用親和純化磁珠，研究人員能夠更快速地獲取高純度的蛋白質，為后續的功能研究和應用奠定堅實基礎。默克的蛋白純化磁珠服務是一套為現代生物學實驗室設計的「精煉」工具，它通過將分離步驟極致簡化，極大地提升了蛋白純化的效率與體驗，特別適合在高通量、自動化、快速驗證的場景下替代傳統方法。

Anti-FLAG? M2 磁珠：高效的 FLAG? 標簽蛋白純化和 IP 方案

Anti-FLAG? M2 抗體可識別融合蛋白 N 端、Met-N 端或 C 端的 FLAG? 八肽序列（N-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-C），ANTI-FLAG? M2 親和磁珠（貨號：M8823）是結合 ANTI-FLAG? M2 小鼠單抗、平均直徑為 50 μm 的超順磁鐵包覆的 4% 瓊脂糖微珠，提供一種簡單、便捷的方法，用于從哺乳動物、細菌和植物提取物中對 FLAG? 標簽融合蛋白進行蛋白純化、免疫沉淀和蛋白互作研究。

特點和優勢：

高特異性：純化得到的蛋白純度高，通常無需進一步純化

高效便捷：磁性特性允許快速從懸浮液中分離磁珠，結合磁力平臺輕松實現高通量操作

高可重現：簡化的操作流程，避免樣品損失，結果更可控，目的蛋白定量更精確

應用舉例：

高效捕獲 FLAG? 標簽蛋白：磁力架輔助和洗脫方法優化

ANTI-FLAG? M2 親和磁珠識別并捕獲 FLAG? 肽融合蛋白，結合磁力架即可高效實現小規模的 FLAG 標簽蛋白純化和 IP 操作。

Anti-FLAG? M2 磁珠結合的融合蛋白可通過多種方法洗脫，包括肽競爭法、酸性法和 SDS-PAGE 上樣緩沖液法。

本文對三種洗脫方法進行了比較。結果表明：

1

3X FLAG? 肽競爭和酸性（pH 2.5～3.0）洗脫法對 Anti-FLAG? M2 磁珠的洗脫最為高效。這類磁珠不適合堿性洗脫（pH 8～10）

2

用 3X FLAG? 肽洗脫時，樣品需與 100～150 ng/μL FLAG 肽共同孵育 30 分鐘，酸性洗脫時，與 0.1 M 甘氨酸-鹽酸（pH 2.5～3.0）的孵育時間則不到 10 分鐘，延長甘氨酸-鹽酸的洗脫時間并不能增加蛋白洗脫量。

3

使用 SDS-PAGE 上樣緩沖液洗脫的條件較為簡單，但由于上樣緩沖液中的 SDS 造成 M2 抗體變性，凝膠電泳出現了對應 anti-FLAG? 抗體重鏈和輕鏈的條帶。

使用三種洗脫方法的小規模 anti-FLAG? M2 磁珠免疫沉淀實驗方案

比較 ANTI-FLAG? M2 磁珠免疫沉淀的三種洗脫方法。St = 起始材料；3X = 3X FLAG? 肽，pH = 2.5 甘氨酸

比較甘氨酸孵育 5 至 30 分鐘范圍的洗脫組分。左圖：考馬斯亮藍染色凝膠。右圖：ANTI-FLAG? M2 抗體的免疫印跡。

PureProteome? 磁珠：高通量蛋白純化和 IP 方案

默克提供全面、質量卓越的純化磁珠產品，提供高效的蛋白純化方案，助力自動化純化方案。其中，PureProteome?系列磁珠將蛋白/標簽試劑共價偶聯到順磁性親和介質（ 即磁珠） 上，進一步增強了純化介質的應用性。PureProteome? 磁珠包括 Protein A/G 混合磁珠、抗體亞型純化磁珠、鎳磁珠等，是抗體/蛋白純化、血清耗竭、IP、Co-IP 等應用的高效方案。

特點優勢：

高結合能力：增加的表面積使結合能力是同類磁珠的 6 倍以上

高特異性：非特異性吸附低，極大地降低了背景，獲得高純度蛋白、抗體

結果一致：簡化的操作流程，完全去除緩沖液且無樣品損失，更可控

快速高效：增強的結合平衡將孵育時間減少超過 50%

應用舉例：

HIS TAG? 蛋白自動化純化 - PureProteome? 鎳磁珠 & AAW? 平臺

HIS 標簽（組氨酸標簽）是生物分子純化中最常用的標簽之一，由于其簡便性和高特異性，HIS 標簽不僅提高了純化效率，還減少了后續處理的復雜性。然而，在分析數百個新生成的突變體時，篩選重組標簽蛋白的表達也是一項具有挑戰性的任務。

我們經過驗證的自動化方案在 2.5 小時內使用鎳-HIS 結合磁珠對 96 孔的細胞漿進行純化，最終得到的 96 孔分離蛋白可以通過多種方法進一步分析，包括毛細管電泳（CE）、液相色譜-質譜（LC-MS）或其他高通量檢測。

PureProteome? 鎳磁珠是自動化純化的理想選擇，因為其相對較高的結合能力（1～5 μg 蛋白/mL 珠懸液）和耐用的珠類型（硅珠）。將這些珠與裂解溶液如 CelLytic? B 試劑或 BugBuster? 主混合物結合，可以創建高效的裂解和捕獲方法，非常適合由 Opentrons? 驅動的 AAW? 系統。

PureProteome? 用戶指南方案已被編為 Python 代碼，經過測試并通過 Millipore? 應用庫提供下載。一旦下載到儀器上，它可以用于執行所有液體處理步驟，包括一步裂解和捕獲、三次洗滌和兩次洗脫步驟，以及所有搖動和磁性分離操作。

手工方法和 AAW? 方法的產量對比：同時展示了用于大腸桿菌表達的兩個構建體，P0A710 和 P0A749。

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內容策劃：王丹琦

內容審核：鐘可可

題圖來源：圖蟲創意