動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)手冊(cè)丨條件性位置偏好實(shí)驗(yàn)（CPP）測(cè)試方法及注意事項(xiàng)

條件性位置偏好實(shí)驗(yàn)（Conditioned Place Preference, CPP）是一種廣泛應(yīng)用于嚙齒類(lèi)動(dòng)物的行為學(xué)范式，主要用于評(píng)估藥物、自然獎(jiǎng)賞（如食物、社交、性行為）。其核心原理是：動(dòng)物會(huì)將環(huán)境中特定的線索（如視覺(jué)、觸覺(jué)、空間特征）與獎(jiǎng)賞體驗(yàn)關(guān)聯(lián)起來(lái)，并在后續(xù)測(cè)試中表現(xiàn)出對(duì)該環(huán)境的偏好。

CPP裝置由有機(jī)玻璃（Plexiglas）制成，整體尺寸為45 cm（長(zhǎng)）× 15 cm（寬）× 15 cm（高）。裝置內(nèi)插入兩塊可拆卸的有機(jī)玻璃隔板，將其分隔為三個(gè)區(qū)域：兩個(gè)大小相等的外側(cè)大室（各20 × 15 × 15 cm）和一個(gè)中間的灰色小室（5 × 15 × 15 cm）。其中一個(gè)大室被設(shè)為“白色室”，其墻壁貼有黑白垂直條紋，地面鋪設(shè)白色金屬網(wǎng)；另一個(gè)大室為“黑色室”，墻壁為黑白水平條紋，地面為光滑的黑色有機(jī)玻璃板。因此，兩個(gè)外側(cè)室在視覺(jué)和觸覺(jué)線索上均具有明顯差異。

實(shí)驗(yàn)中使用的可拆卸隔板與其對(duì)應(yīng)側(cè)室的內(nèi)壁設(shè)計(jì)一致，用于在訓(xùn)練階段完全封閉兩側(cè)隔室。裝置頂部覆蓋透明有機(jī)玻璃蓋，便于通過(guò)連接至電腦的高清網(wǎng)絡(luò)攝像頭實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)動(dòng)物行為。

Fig1 CPP箱體

實(shí)驗(yàn)步驟

小鼠分組與配對(duì)：為每只小鼠分配專(zhuān)屬 CPP 箱室并平衡可卡因-箱室配對(duì)（每組中一半小鼠可卡因配對(duì)白色箱，另一半配對(duì)方格紋箱），確保對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組在各箱室均勻分布，避免箱室偏倚；實(shí)驗(yàn)者對(duì)小鼠分組雙盲。

藥物準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求配制可卡因溶液，初步實(shí)驗(yàn)推薦劑量為10mg/kg。

設(shè)置視頻錄制與實(shí)時(shí)追蹤功能。

（2）小鼠處理（實(shí)驗(yàn)第 1-3 天）

每日流程：將小鼠籠轉(zhuǎn)移至行為室。

適應(yīng)訓(xùn)練：抓住小鼠尾基部，將其放入操作套，讓小鼠自由探索 3 分鐘后放回籠中；每處理 1 只小鼠后，清潔手套與操作套；所有小鼠處理完畢后將其送回飼養(yǎng)室。

（3）預(yù)測(cè)試（實(shí)驗(yàn)第 4 天，時(shí)長(zhǎng) 15 分鐘）

裝置清潔：用 70% 乙醇清潔各 CPP 箱室，墊料可保留。

小鼠放置：打開(kāi)閘門(mén)將各箱連通，抓住小鼠尾基部轉(zhuǎn)移至掌心，將其放入所屬 CPP 箱的中箱，確保小鼠面向中箱的灰色墻壁（減少初始偏倚）。

行為記錄：記錄 15 分鐘內(nèi)小鼠在方格紋箱、白色箱、中箱的停留時(shí)間；15 分鐘后，關(guān)閉閘門(mén)將小鼠限制在中箱，抓住尾基部轉(zhuǎn)移回籠中。

后續(xù)處理：將所有小鼠送回飼養(yǎng)室，清潔 CPP 箱室，準(zhǔn)備下一批小鼠測(cè)試（若分批次）。

4）條件化（實(shí)驗(yàn)第 5-8 天，共 4 天）

在CPP訓(xùn)練階段，第5天為可卡因配對(duì)日：小鼠經(jīng)腹腔注射可卡因后，立即被放入預(yù)設(shè)的可卡因配對(duì)外箱中，關(guān)閉閘門(mén)，停留30分鐘（此階段通常無(wú)需錄制視頻，若需觀察條件化期間的活動(dòng)可選擇開(kāi)啟錄像）。第6天為生理鹽水配對(duì)日：小鼠腹腔注射等體積生理鹽水后，被置于另一外觀明顯不同的外箱中，同樣關(guān)閉閘門(mén)，停留30分鐘。第7天重復(fù)第5天的操作，再次進(jìn)行可卡因注射與對(duì)應(yīng)外箱的配對(duì)；第8天則重復(fù)第6天的流程，完成第二次生理鹽水與另一外箱的配對(duì)，從而建立藥物效應(yīng)與特定環(huán)境線索之間的穩(wěn)定關(guān)聯(lián)。

5）休息（實(shí)驗(yàn)第 9 天）

小鼠留在飼養(yǎng)籠中，無(wú)任何處理，減少應(yīng)激。

6）后測(cè)試（實(shí)驗(yàn)第 10 天，時(shí)長(zhǎng) 15 分鐘）

流程與預(yù)測(cè)試完全一致，記錄小鼠在各箱室的停留時(shí)間，用于計(jì)算后測(cè)試 CPP 評(píng)分。

數(shù)據(jù)評(píng)估

CPP 評(píng)分：CPP 評(píng)分 = 小鼠在可卡因配對(duì)箱的停留時(shí)間（秒）- 在生理鹽水配對(duì)箱的停留時(shí)間（秒）；分別計(jì)算預(yù)測(cè)試與后測(cè)試的 CPP 評(píng)分，若后測(cè)試評(píng)分較預(yù)測(cè)試顯著提升，表明可卡因的獎(jiǎng)賞效應(yīng)成立。

注意事項(xiàng)

小鼠排除標(biāo)準(zhǔn)：預(yù)測(cè)試中 CPP 評(píng)分超出 ±250 秒的小鼠需排除，避免初始偏倚影響結(jié)果。

環(huán)境控制：行為室不可用于手術(shù)或動(dòng)物飼養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)者需更換無(wú)異味衣物，避免香水等氣味干擾；小鼠轉(zhuǎn)移時(shí)避免噪音、震動(dòng)，減少應(yīng)激。

操作一致性：全程使用同類(lèi)型手套，每次處理小鼠后清潔手套與操作套；注射劑量、放置小鼠的方向等操作需標(biāo)準(zhǔn)化。

文獻(xiàn)引用：

• Manke HN, Nunn SS, Jones RA, Rice KC, Riley AL. Male and female C57BL/6 mice display drug-induced aversion and reward in the combined conditioned taste avoidance/conditioned place preference procedure. Pharmacol Biochem Behav. 2023 Apr;225:173562. doi: 10.1016/j.pbb.2023.173562. Epub 2023 May 6. PMID: 37156400.

• Simkevich, M. J., Campbell, R. R. and White, A. O. (2020). Examining Cocaine Conditioning Place Preference in Mice. Bio-protocol 10(8): e3595. DOI: 10.21769/BioProtoc.3595.

• Itzhak, Y., Martin, J. Cocaine-induced Conditioned Place Preference in Mice: Induction, Extinction and Reinstatement by Related Psychostimulants. Neuropsychopharmacol 26, 130–134 (2002). https://doi.org/10.1016/S0893-133X(01)00303-7
  

• Vijayapandi Pandy, Kamini Vijeepallam, Nurul Fatin Amira Roslan, Arif Sajat, Yew Chang Wai, Phani Sai Vennela Ramisetty, Vulli Naga Jyothi,Scopoletin and rutin attenuate ethanol reward in mouse-conditioned place preference test,Pharmacological Research - Modern Chinese Medicine,Volume 12,2024,100501,ISSN 2667-1425,https://doi.org/10.1016/j.prmcm.2024.100501.

• McKendrick G, Graziane NM. Drug-Induced Conditioned Place Preference and Its Practical Use in Substance Use Disorder Research. Front Behav Neurosci. 2020 Sep 29;14:582147. doi: 10.3389/fnbeh.2020.582147. PMID: 33132862; PMCID: PMC7550834.

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