近日,東北農業大學陳慶山團隊趙瑩副教授在JIPB期刊上發表題為“The GmGT-2F, a Trihelix transcription factor, regulates seed oil content by directly activating GmAGAL transcription in soybean”的研究成果。東北農業大學博士后李雙哲、副教授崔一凡、博士生劉洋為論文共同第一作者,東北農業大學趙瑩副教授為論文的通訊作者。
研究人員通過全基因組分析鑒定到大豆Trihelix家族成員GmGT-2F,該基因定位于細胞核,且在種子發育中后期特異性高表達。利用CRISPR-Cas9技術和轉基因技術創制了GmGT-2F敲除突變體(gmgt-2f)和過表達株系(GmGT-2F-OE)。過表達GmGT-2F顯著提高種子含油量(增幅4.71%–7.37%),且油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸含量顯著增加;敲除GmGT-2F則使含油量下降8.76%–11.11%,但種子蛋白質含量和粒重顯著提升。電鏡觀察顯示,GmGT-2F-OE株系種子油體數量增多,蛋白儲存液泡減少,反之亦然,證實其在油分與蛋白積累平衡中的關鍵作用。
通過RNA-seq與DAP-seq聯合分析,鑒定到GmGT-2F的下游靶基因GmAGAL,該基因編碼α-半乳糖苷酶。進一步實驗驗證表明,GmGT-2F直接結合GmAGAL啟動子的M1(GAGAAGAC)和M2(AAGAAAAAAG)基序,激活其轉錄。GmAGAL敲除株系(gmagal)及雙敲除株系(gmgt-2f/gmagal)的α-半乳糖苷酶活性顯著降低,種子含油量同步下降,證實GmAGAL是GmGT-2F調控通路的核心下游基因。代謝組分析表明,GmGT-2F通過調控GmAGAL活性,可能影響蔗糖生成與分配,進而調控油脂合成關鍵基因GmWRI1的表達。酵母雙雜交、BiFC、CO-IP、Pull-down,LUC等實驗發現,GmCYP2蛋白可與GmGT-2F相互作用,抑制其對GmAGAL的轉錄激活能力,形成調控通路的負反饋機制。
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