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      《食品科學》:安徽中醫藥大學胡江苗研究員等:化學降解方法對鐵皮石斛多糖理化性質和抗衰老活性的影響

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      多糖是由多種單糖及其衍生物組成的一系列天然大分子活性物質,因具有多種活性功能而受到越來越多的關注。食品工業中常采取適當的降解方法獲取具有合適分子質量的多糖,據文獻報道目前常用的降解方法有化學降解法、酶降解法和微生物降解法等。

      鐵皮石斛(

      Dendrobium officinale
      )為蘭科石斛屬植物,藥用歷史十分久遠。多糖是鐵皮石斛中最主要的成分,其單糖組成主要是葡萄糖、甘露糖,部分含有鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等,但目前針對鐵皮石斛多糖(DOP)降解方法的研究較少,這極大地限制了其在食品工業中的應用。

      在化學降解方法中,VC法具有一定的優勢。L-抗壞血酸也被稱為VC,是一種天然存在的有機化合物和重要的食品添加劑。具有抗氧化、抗衰老、抗癌、免疫調節等活性。由于抗壞血酸在反應過程中分解,這種氧化體系的降解產物純度高,從而能夠實現高效的生態友好和生物安全降解。目前關于VC對DOP的降解作用還鮮見報道。

      安徽中醫藥大學藥學院的曾燚、胡江苗*和中國科學院昆明植物研究所的楊柳*等人利用VC這一高效的生態友好和生物安全降解方法獲得鐵皮石斛低聚糖,同時比較VC降解方法與H2O2降解法和平酸降解法對DOP降解效果的差異,以期為DOP降解方法研究以及在抗衰老方面的應用提供理論參考。


      1

      DOP分子質量分析

      如圖1所示,DOP的保留時間主要集中在組分I(保留時間

      t
      R = 4.5 min左右), 分子質量為 1.168×107 Da 。H 2 O 2 法和檸檬酸法處理后,分子質量主要集中在組分I,與未處理前的DOP分子質量分布一致,由此可見,H 2 O 2 法和檸檬酸法對DOP沒有降解作用。而用VC法和H 2 O 2 -VC法處理后,DOP的保留時間有所延后,在HPLC分析圖中,組分I占比明顯降低,組分II與組分III占比較多,分子質量小于組分I,組分II(
      t
      R = 5.923 min左右)分子質量為 9.24×10 5 Da,組分III(
      t
      R = 8.239 min左右) 分子質量為 1.49×10 4 Da;這兩種化學降解方法降解效果相似;結果表明,H 2 O 2 -VC法和VC法對DOP有一定的降解作用,處理后分子質量降低。


      2

      DOP總糖和蛋白含量分析

      對達5種多糖進行總糖、蛋白質量分數分析,如表1所示,H2O2-VC法和VC法蛋白含量降解后有所提高,各組總糖質量分數降解前后無明顯差異。


      3

      DOP的FTIR分析

      如圖2所示,DOP和降解多糖的特征吸收峰相似,結果表明降解處理沒有改變多糖的主要官能團結構。3500 cm-1 附近是—OH的伸縮振動吸收峰,為糖類特征峰。在 2920 cm-1 附近的吸收峰歸因于C—H伸縮振動。1636 cm-1 附近的吸收峰歸因于 C=O 伸縮振動。3433 cm-1 附近寬大的強烈吸收峰為糖環上的—OH吸收峰;而 2889 cm-1 和 1417 cm-1 附近的吸收峰則是由糖環上C—H鍵的伸縮振動和彎曲振動引起;在 1637 cm-1在 1637 cm-1 附近的微弱吸收峰是由—OAc(乙酰基)上的 C=O 伸縮振動引起。800~1200 cm-1 區域被認為是多糖的“指紋”區域。在 1000~1200 cm-1 區域的吸收峰群是由糖環間的氧橋C—O—C引起,而 872 cm-1 和 807 cm-1 的吸收峰屬于典型的

      構型多糖的吸收峰。綜上分析可知DOP和降解多糖是乙?;〈?blockquote id="4B4H9NDN">構型多糖。


      4

      DOP單糖組成分析

      根據上述結果,H2O2法和檸檬酸法對DOP無明顯降解作用,H2O2-VC法和VC法對DOP有一定的降解作用,這兩種化學降解方法作用機理相同且降解效果相似;且VC會在反應過程中分解,這種氧化體系的降解產物純度高,可以實現高效的生態友好降解。后續研究均以DOP及VC-DOP為代表,對DOP和VC法處理后的多糖樣品進行單糖組成分析,如圖3所示,降解前后單糖種類沒有差異,均為中性多糖,主要由葡萄糖、甘露糖組成,說明化學方法降解不改變多糖的單糖組成,這與先前研究結論一致。




      5

      DOP表觀結構分析

      為了全面分析VC對DOP的降解作用,對DOP和VC-DOP進行掃描電鏡觀察。如圖4所示,DOP表面較粗糙、有較多片狀結構、少量孔隙;VC-DOP表面變得較平滑,可以觀察到大量孔隙并且孔隙結構較復雜、孔隙增大、片狀結構數量減少,呈現出較多的網狀、絲狀以及少量的球狀結構,表明降解后多糖的結構變得松散。


      6

      DOP粒徑與電位分析

      通過測量粒徑和電位可以初步判斷DOP的聚合度和穩定性,一般情況下,當粒子的電位接近 ±30 mV 時,其穩定性相對較強;而當粒子的電位較低時,穩定性也會相對降低。如圖5所示,VC-DOP的電位絕對值較DOP降低,VC-DOP的粒徑分布較DOP有所降低,從粒徑和電位變化來看,DOP經VC處理后,分子質量降低,聚合度下降,這與HPLC檢測結果一致,這可能是因為VC處理后,DOP的聚合度降低,低分子質量段組分增加。



      7

      DOP和VC-DOP表觀黏度分析

      如圖6A所示,室溫條件下,DOP和VC-DOP表觀黏度隨著多糖溶液質量濃度的增加而增大,同一質量濃度條件下,DOP的表觀黏度大于VC-DOP。如圖6B所示,DOP和VC-DOP表觀黏度隨著溫度的增加而減小,同一溫度條件下,DOP的表觀黏度大于VC-DOP。如圖6C所示,當溶液pH值為7時,DOP和VC-DOP表觀黏度無明顯差異;當pH值為5時,VC-DOP表觀黏度較DOP明顯降低;當pH值為9時,DOP和VC-DOP表觀黏度均降低,總體來說,VC-DOP的表觀黏度受pH值的影響大于DOP。

      綜上,同一質量濃度或同一溫度條件下,DOP的表觀黏度大于VC-DOP。Li Ouye等研究發現VC可以顯著降低積雪草種子多糖的黏度,這可能與VC降低其分子質量有關。由此可以說明VC處理后多糖表觀黏度減小可能是因為多糖分子質量降低,聚合度下降。




      8

      DOP和VC-DOP的抗衰老活性分析

      對DOP和VC-DOP的體外人I型膠原蛋白促泌能力進行評價,如圖7A所示,與空白組相比,DOP和VC-DOP均具有一定的促膠原蛋白分泌作用,VC-DOP組在低質量濃度 100 μg/mL 表現出比DOP組更好的促膠原蛋白分泌能力。由圖7B可知,DOP和VC-DOP均具有一定的彈力蛋白酶抑制作用,VC-DOP組在質量濃度 200 μg/mL 條件下表現出比DOP組更高的彈力蛋白酶抑制率。總體來說,VC-DOP表現出較好的彈力蛋白酶抑制作用。如圖7C所示,DOP和VC-DOP均具有一定的膠原蛋白酶抑制作用,DOP組在質量濃度200、400 μg/mL 時膠原蛋白酶抑制率高于VC-DOP組;可以得出,DOP表現出較好的膠原蛋白酶抑制作用。




      討論與結果

      為研究化學降解方法對DOP理化性質與抗衰老活性的影響,通過VC、H2O2、H2O2-VC、檸檬酸法制備4種降解多糖,其分子質量測定結果表明,DOP主要由組分I(

      t
      R = 4.5 min)構成,分子質量為 1.168×10 7 Da。H 2 O 2 法和檸檬酸法處理后,分子質量分布與未處理前的DOP一致,由此可見,H 2 O 2 法和檸檬酸法對DOP沒有明顯的降解作用;經過HPLC檢測發現VC-DOP由組分II、III2個不同分子質量組分構成,組分I分子質量大于組分II、III;組分II(
      t
      R = 5.923 min左右)分子質量為 9.24×10 5 Da,組分III(
      t
      R = 8.239 min左右)分子質量為 1.49×10 4 Da;表明VC和H 2 O 2 -VC處理可部分降解DOP,總糖、蛋白質檢測結果表明,降解后,各組總糖質量分數無明顯變化,蛋白含量有所提高;FTIR結果表明, 與DOP相比,這4種化學降解方法沒有破壞其主要官能團,保留了多糖的特征吸收峰;單糖組成結果表明,降解前后多糖均主要由甘露糖和葡萄糖組成;經過掃描電子顯微鏡觀察發現DOP主要由片狀結構組成,而降解后多糖絲狀結構增加,更有少許的球狀結構出現,孔隙密度增加或直徑增大,表明降解使多糖結構更松散;表觀黏度和平均粒徑測定結果表明,與降解前相比,降解后多糖表觀黏度和粒徑均降低,而電位絕對值降低,表明經過VC處理,DOP發生不同程度降解。對DOP和VC-DOP的體外人I型膠原蛋白促滲作用、彈力蛋白酶抑制率以及膠原蛋白酶抑制率進行評價,結果表明:與模型組相比,DOP和VC-DOP均具有一定的促膠原蛋白分泌作用,VC-DOP組在低質量濃度(100 μg/mL)表現出比DOP組更好的促膠原蛋白分泌能力;DOP和VC-DOP均具有一定的彈力蛋白酶抑制作用,VC-DOP組在質量濃度 200 μg/mL 表現出比DOP組更高的彈力蛋白酶抑制率。DOP和VC-DOP均具有一定的膠原蛋白酶抑制作用,DOP表現出較好的膠原蛋白酶抑制作用。

      綜上所述,經過VC處理后,DOP的分子質量降低,VC對DOP有一定的降解作用,改變了其表觀黏度,保留了其原有的結構特征;分子質量的降低對DOP的抗衰老活性也有一定的影響,降解后低分子質量段組分增加,低分子質量組分多糖在實際應用中較高分子質量組分更容易吸收,且降解后結構變得松散,降解后多糖表觀黏度和粒徑均降低,Zeta電位絕對值降低,這些理化性質的改變可能影響了VC-DOP與DOP的膠原蛋白促滲活性,因此推測這是VC-DOP在質量濃度 200、400 μg/mL 時表現出更好的彈力蛋白酶抑制作用和膠原蛋白促滲作用的原因。本研究可為DOP在抗衰老活性方面的應用提供參考。

      引文格式:

      曾燚, 楊益娜, 邵會艷, 等. 化學降解方法對鐵皮石斛多糖理化性質和抗衰老活性的影響[J]. 食品科學, 2025, 46(7): 92-99.DOI:10.7506/spkx1002-6630-20240809-081.http://www.spkx.net.cn

      ZENG Yi, YANG Yina, SHAO Huiyan, et al. Effect of chemical degradation on physicochemical properties and anti-aging activity of

      Dendrobium officinale
      polysaccharides[J]. Food Science, 2025, 46(7): 92-99. (in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-20240809-081.http://www.spkx.net.cn

      實習編輯:魏雨諾;責任編輯:張睿梅。點擊下方閱讀原文即可查看全文。圖片來源于文章原文及攝圖網



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