Hepatology | 中國科學(xué)家自主研發(fā)乙肝病毒研究利器，為治愈提供新視角

我國目前仍有逾9000萬慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者，現(xiàn)有治療下功能性治愈仍然存在諸多挑戰(zhàn)。華山感染科團(tuán)隊(duì)在大型真實(shí)世界隊(duì)列和隨機(jī)對(duì)照臨床研究中，明確了即便采用序貫聯(lián)合等優(yōu)化策略和優(yōu)勢(shì)人群選擇，核苷與干擾素等現(xiàn)有抗病毒治療實(shí)現(xiàn)功能性治愈的概率仍然有限，即使在嚴(yán)格篩選患者后，核苷停藥仍會(huì)有一定的病毒復(fù)發(fā)概率。團(tuán)隊(duì)在前期工作中，HBV核酸原位雜交檢測(cè)（RNAscope）和免疫組化驗(yàn)證，觀察到在長期NA抗病毒治療，或IFN足療程治療后，數(shù)量顯著減少但持續(xù)存在HBV RNA陽性細(xì)胞，這些細(xì)胞即為狡詐的乙肝病毒慢性感染后藏匿在肝臟內(nèi)的“儲(chǔ)存庫”，是功能性治愈難以實(shí)現(xiàn)和停藥后復(fù)發(fā)的主要原因，其難以被藥物或免疫徹底清除的機(jī)制待進(jìn)一步明確。

近日，復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院感染科張文宏教授、仇超教授團(tuán)隊(duì)聯(lián)合多家單位，在肝病領(lǐng)域國際權(quán)威期刊Hepatology 上發(fā)表了一項(xiàng)題為"Host-viral interaction of HBV infection revealed by single-cell transcriptome jointly profiling the viral replication state"重磅研究。

該團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)了一項(xiàng)名為B-BEST 的基于單細(xì)胞測(cè)序的新技術(shù)，突破了傳統(tǒng)技術(shù)瓶頸，首次在單細(xì)胞水平上“看清”了乙肝病毒在肝細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)狀態(tài)，為乙肝功能性治愈提供了全新的視角。傳統(tǒng)檢測(cè)主要靠抽血或分析肝組織，只能看病毒mRNA或蛋白（如HBsAg、HBcAg），而且一次只能測(cè)一兩個(gè)指標(biāo)，信息很粗糙，殘留“頑固”細(xì)胞的比例很少。所以無法明確病毒具體感染了哪些肝細(xì)胞、病毒這些“頑固”細(xì)胞里是活躍復(fù)制還是靜靜儲(chǔ)存，也不知道這些細(xì)胞怎樣影響肝臟炎癥病理損傷。這些問題一直困擾著科學(xué)家。

隨著單細(xì)胞測(cè)序發(fā)展，讓我們有望更精細(xì)地研究病毒和宿主的關(guān)系。然而，傳統(tǒng)單細(xì)胞測(cè)序方法中更適用于檢測(cè)人的信息，難以有效捕獲低拷貝的HBV序列，導(dǎo)致感染病毒的細(xì)胞檢出率低。打個(gè)比方，來源于人的細(xì)胞的核酸序列像海水一樣多，想抓到里面的病毒核酸，無異于大海撈針。

該團(tuán)隊(duì)研發(fā)的B-BEST 技術(shù)，在常規(guī)“釣竿”上加了5個(gè)專門抓捕病毒的“自動(dòng)魚鉤”，能高效捕捉到乙肝病毒的多個(gè)關(guān)鍵區(qū)域（S、X、pgRNA、rcDNA、cccDNA）。相比傳統(tǒng)方法，對(duì)病毒序列的檢測(cè)效率提高了100倍以上，解決了低豐度病毒核酸難以捕獲的難題；結(jié)合高通量單細(xì)胞技術(shù)，可以一次性捕獲并同時(shí)分析數(shù)萬個(gè)細(xì)胞，突破了關(guān)鍵技術(shù)瓶頸。

同時(shí)，該團(tuán)隊(duì)還從單細(xì)胞水平精準(zhǔn)呈現(xiàn)了HBV對(duì)宿主細(xì)胞的選擇性、HBV復(fù)制對(duì)宿主代謝機(jī)制的依賴、HBV感染后肝細(xì)胞的響應(yīng)和清除作用、HBV的免疫逃逸等方面，描述了HBV感染過程中的宿主-病毒交互作用，為乙肝病毒持續(xù)感染和功能性治愈的機(jī)制提供了新的視角與思路。未來，隨著多組學(xué)技術(shù)和臨床抗病毒治療新藥的迭代，B-BEST將持續(xù)助力科研人員為終結(jié)乙肝威脅提供更精準(zhǔn)的科學(xué)支撐和突破路徑。

本文轉(zhuǎn)載自 ：華山感染

本期編輯：木木