西湖大學(xué)于洪濤/施一公及深圳醫(yī)學(xué)科學(xué)院胡名旭/顏寧2篇PNAS

染色質(zhì)加載六聚體復(fù)制解旋酶MCM2–7復(fù)合物需要其與起點識別復(fù)合物（ORC）、CDC6及CDT1進行協(xié)調(diào)的交互作用。未與DNA結(jié)合的MCM2–7形成一個單六聚體（SH），其DNA進入門位于MCM2與MCM5之間。兩個MCM2–7單六聚體可依次加載形成環(huán)繞DNA雙鏈的雙六聚體（DH）。活化的MCM2–7隨后解旋DNA并啟動DNA復(fù)制。

2026年2月20日，西湖大學(xué)于洪濤及施一公團隊合作在PNAS在線發(fā)表題為“A Meier–Gorlin syndrome mutation impairs the loading of the MCM2–7 complex during DNA replication initiation”的研究論文。該研究顯示，一部分未結(jié)合DNA的人源MCM2–7以雙六聚體形式存在。

出乎意料的是，作者發(fā)現(xiàn)無論在無DNA的雙六聚體還是單六聚體中，MCM3的翼螺旋結(jié)構(gòu)域（WHD）均停靠在MCM2上，從而在DNA進入門處形成一個安全閂，以阻止DNA進入中央通道。該安全閂可被ORC-CDC6的結(jié)合所打開。通過基于結(jié)構(gòu)的突變或與疾病相關(guān)的MCM3突變干擾此閂鎖，會導(dǎo)致復(fù)制缺陷并激活DNA損傷檢查點。縮短MCM3解旋酶結(jié)構(gòu)域與翼螺旋結(jié)構(gòu)域之間的連接區(qū)，可緩解閂鎖強化突變引起的細胞周期缺陷。作者的研究結(jié)果揭示了MCM2–7加載過程中的一個受調(diào)控步驟，這對人類疾病具有潛在意義。

另外，在2026年2月25日，深圳醫(yī)學(xué)科學(xué)院特聘研究員胡名旭，清華大學(xué)生命學(xué)院副教授王佳偉，深圳醫(yī)學(xué)科學(xué)院創(chuàng)始院長、深圳灣實驗室主任顏寧合作（張起是該文的第一作者）在PNAS在線發(fā)表題為“Absolute hand determination of glycofibrils from natural sources in cryo-EM”的研究論文，該研究介紹了一種名為 Ahaha 的簡單且高效的在冷凍電子顯微鏡下確定天然來源糖纖維絕對手性的方法。通過Ahaha的絕對測量法，該研究構(gòu)建了四個來自天然水樣糖纖維素的原子模型，這有助于對糖類的研究。Ahaha的在線服務(wù)網(wǎng)址為：https://cryoseek.org/ahaha。

基因組DNA的忠實復(fù)制確保了基因組的穩(wěn)定性。DNA復(fù)制在每次細胞分裂周期中嚴格限制為“一次且僅一次”。由六個亞基（ORC1–6）組成的復(fù)制起點識別復(fù)合物（ORC）在整個細胞周期中結(jié)合于復(fù)制起點。在G1期，ORC、CDC6和CDT1共同作用，將六聚體復(fù)制解旋酶MCM2–7裝載到染色質(zhì)上。在S期，MCM2–7通過磷酸化以及CDC45和GINS的結(jié)合而被激活，形成具有活性的CDC45-MCM2–7-GINS（CMG）解旋酶；該解旋酶負責解開DNA雙鏈、啟動復(fù)制體形成并起始DNA復(fù)制。MCM2–7的裝載發(fā)生在整體細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）活性較低的G1期，而其激活則僅能在CDK活性較高的S期進行。當CDK活性較高的S/G2期，MCM2–7無法重新裝載。CDK活性對MCM2–7裝載與激活的差異性調(diào)控，確保了DNA復(fù)制與細胞分裂的協(xié)調(diào)進行。

通過體外重構(gòu)、冷凍電子顯微鏡（cryo-EM）及單分子生物物理學(xué)實驗對復(fù)制前復(fù)合體（pre-RC，尤其是芽殖酵母的pre-RC）組裝過程的研究，為闡明Mcm2–7裝載與激活的分子機制提供了關(guān)鍵見解。在無DNA存在時，游離的Mcm2–7以單個六聚體（SH）形式存在，其DNA進入門位于Mcm2與Mcm5之間。然而，Mcm2–7的DNA結(jié)合中央通道被Mcm4和Mcm5的翼狀螺旋結(jié)構(gòu)域（WHD）所占據(jù)。在酵母pre-RC組裝過程中，Cdc6與DNA結(jié)合的Orc結(jié)合，形成一個功能性ATP酶。隨后，Orc-Cdc6招募并裝載由Cdt1穩(wěn)定的Mcm2–7 SH，在DNA上形成Orc-Cdc6-Cdt1-Mcm2–7（OCCM）復(fù)合物。

結(jié)構(gòu)與功能研究表明，Mcm亞基的ATP水解驅(qū)動Mcm2–7復(fù)合物單向遠離Orc-Cdc6基座進行核轉(zhuǎn)位；這一過程伴隨著解旋酶沿DNA成熟時Cdc6和Orc1的逐步解離——最近通過對裝載過程中捕獲中間態(tài)的ATP酶缺陷型Mcm變體進行冷凍電鏡分析，闡明了此過程。在Cdc6和Cdt1釋放后，Orc相對于已裝載的Mcm2–7 SH轉(zhuǎn)換位置，形成Mcm2–7-Orc（MO）復(fù)合物，并將第二個由Cdt1穩(wěn)定的Mcm2–7 SH裝載到DNA上。在釋放Orc-Cdc6和Cdt1后，兩個已裝載的Mcm2–7 SH形成頭對頭的雙六聚體（DH），環(huán)繞DNA雙鏈。值得注意的是，近期在芽殖酵母中的研究表明，DH的形成可以不通過Orc循環(huán)，而是在兩個高親和力位點獨立裝載完成。在包括人類在內(nèi)的后生動物中，MCM2–7 DH可以通過兩個單個六聚體在DNA上獨立裝載，隨后相互結(jié)合形成DH，這表明解旋酶裝載機制具有可塑性。

模式機理圖（圖片源自PNAS）

盡管MCM2–7裝載與調(diào)控的整體框架在真核生物中保守，但該過程存在物種特異性特征。例如，酵母Mcm2–7與Cdt1穩(wěn)定結(jié)合，而人類MCM2–7本身與CDT1結(jié)合不緊密。近期證據(jù)也表明，在體外，人類MCM2–7可以通過依賴ORC6和不依賴ORC6兩種途徑裝載到DNA上。酵母Mcm2–7 DH在其中央通道中環(huán)繞未解鏈的DNA雙鏈，但人類MCM2–7 DH在其六聚體連接處使DNA雙鏈解鏈。

人類MCM2–7的突變與某些發(fā)育性疾病相關(guān)，例如以侏儒癥及其他異常為特征的邁爾-戈爾林綜合征（MGORS）。為了更好地理解MCM2–7裝載的物種特異性特征以及致病突變的有害效應(yīng)，作者解析了從人類細胞中純化的內(nèi)源性MCM2–7復(fù)合物以及在昆蟲細胞中表達的重組人MCM2–7的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)。作者發(fā)現(xiàn)一部分人類MCM2–7復(fù)合物在無DNA情況下形成了DH。無DNA的MCM2–7 SH和DH的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)顯示，MCM3的WHD停靠于MCM2的C端ATP酶結(jié)構(gòu)域上，形成了一個安全閂，阻止DNA進入MCM2–7的中央通道。有趣的是，一個與MGORS相關(guān)的MCM3突變增強了此閂鎖作用，并抑制了人類細胞中MCM2–7的裝載。該突變同樣導(dǎo)致DNA復(fù)制缺陷并激活G2/M期DNA損傷檢查點。縮短MCM3解旋酶結(jié)構(gòu)域與其WHD之間的連接肽可防止閂鎖關(guān)閉，從而增加MCM2–7的染色質(zhì)結(jié)合并減輕MGORS突變的細胞表型。因此，作者的研究揭示了一種與疾病相關(guān)的MCM2–7裝載調(diào)控機制。

https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2526022123

https://pnas.org/doi/10.1073/pnas.2531477123