動(dòng)物模型構(gòu)建與評(píng)估丨三叉神經(jīng)痛（TN）小鼠模型構(gòu)建與Von Frey測(cè)試方法總結(jié)

三叉神經(jīng)痛（TN）小鼠模型通過(guò)單側(cè)眶下神經(jīng)慢性縮窄損傷建立。小鼠麻醉后，仰臥固定于手術(shù)墊上并暴露口腔；在左側(cè)腭頰黏膜作一長(zhǎng)約0.5 cm的切口，經(jīng)鈍性分離顯露三叉神經(jīng)的眶下神經(jīng)分支，隨后用4.0號(hào)腸線結(jié)扎該神經(jīng)，并在結(jié)扎點(diǎn)遠(yuǎn)端切除約1 mm的神經(jīng)段。

Fig1 Von Frey測(cè)試示意圖 （可根據(jù)需要結(jié)合光遺傳學(xué)等）

Von Frey測(cè)試

Von Frey測(cè)試是一種用于評(píng)估小鼠和大鼠機(jī)械性異常性疼痛的方法。

在該測(cè)試中，動(dòng)物被單獨(dú)放置于底部為金屬網(wǎng)或其它可穿透材質(zhì)的小籠中。實(shí)驗(yàn)者將一根單絲纖維垂直施加于后足底面，直至其彎曲，從而施加一個(gè)恒定且預(yù)先確定的力，持續(xù)2–5秒。若動(dòng)物在刺激過(guò)程中或剛移除纖維后表現(xiàn)出任何傷害性防御行為，如迅速縮回足部、舔舐或甩動(dòng)足部，則視為陽(yáng)性反應(yīng)。雖然最常測(cè)試的區(qū)域是后足底面，但也可測(cè)試身體其他部位，例如后足背側(cè)或腹部。

目前有多種方法利用手動(dòng)Von Frey測(cè)試評(píng)估機(jī)械敏感性，包括“上下法”（up-down method）、“遞增刺激法”（ascending stimulus method）和“百分比反應(yīng)法”（percent response method），應(yīng)用最多主要是“上下法”。

“上下法”用于確定引起50%動(dòng)物出現(xiàn)足部撤回反應(yīng)所需的機(jī)械力，其計(jì)算基于用于確定半數(shù)致死劑量（LD50）的統(tǒng)計(jì)公式。實(shí)驗(yàn)從一根預(yù)估接近50%撤回閾值的纖維開始：若無(wú)反應(yīng)，則換用更高力度的下一根纖維；若有反應(yīng)，則換用更低力度的纖維。如此交替進(jìn)行，直到首次方向改變后至少獲得四次讀數(shù)，并記錄整個(gè)反應(yīng)序列（“?”表示無(wú)反應(yīng)，“+”表示有反應(yīng)）。為準(zhǔn)確計(jì)算50%閾值，通常需要圍繞估計(jì)閾值獲得至少六次反應(yīng)。

50%閾值的計(jì)算公式為：

50% 閾值（克） = 10 (X + k·d) / 10?

其中：

X = 最后一次使用的Von Frey纖維的對(duì)數(shù)值（log單位）

k = 根據(jù)反應(yīng)模式查表所得的系數(shù)

d = Von Frey纖維間力度增量的平均對(duì)數(shù)值（log單位）

腦聲常談建立了多個(gè)《動(dòng)物模型構(gòu)建與行為評(píng)估》交流群，群內(nèi)分享各種經(jīng)典和前沿的行為范式，共同交流解決動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中遇到的棘手問(wèn)題，避坑少走彎路！有需要的老師可以掃碼添加微信進(jìn)入討論群！

行為學(xué)測(cè)試方法

常用von Frey輕觸三叉神經(jīng)支配區(qū)域（如胡須墊），記錄動(dòng)物因疼痛而迅速甩頭、抓臉或躲避的反應(yīng)。

機(jī)械撤回閾值測(cè)試（50% withdrawal threshold）：

使用8根力度范圍為0.007–6.0 g的Von Frey纖維絲垂直施加于后足底內(nèi)側(cè)表面，直至纖維輕微彎曲。若小鼠在4秒內(nèi)迅速縮回足部，視為陽(yáng)性反應(yīng)。采用“上下法”（up–down method）計(jì)算50%機(jī)械撤回閾值。

在三叉神經(jīng)痛的研究中，“withdrawal frequency”（撤回頻率）通常是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在接受面部機(jī)械或熱刺激后，快速縮回頭部、面部或胡須墊的次數(shù)或比例，用于量化其疼痛敏感性或痛覺(jué)過(guò)敏的程度。

撤回頻率測(cè)試（withdrawal frequency test）：

選用6根特定力度的纖維絲（0.07、0.16、0.4、1.0、1.4 和 6.0 g），同樣垂直施加于后足底內(nèi)側(cè)，每根纖維施加1秒，重復(fù)5次。陽(yáng)性反應(yīng)定義為足部對(duì)刺激的快速、即時(shí)撤回。記錄每次刺激的反應(yīng)，并計(jì)算每根纖維引發(fā)撤回反應(yīng)的頻率（即陽(yáng)性次數(shù)/5次）。

Withdrawal frequency =（出現(xiàn)撤回反應(yīng)的次數(shù)/總刺激次數(shù)）× 100%，頻率越高，說(shuō)明動(dòng)物對(duì)刺激越敏感，提示疼痛樣行為增強(qiáng)。

在三叉神經(jīng)痛模型（如慢性壓迫三叉神經(jīng)根、炎癥或神經(jīng)損傷模型）中，withdrawal frequency會(huì)顯著升高；而有效鎮(zhèn)痛藥物處理后，該頻率會(huì)下降。

文獻(xiàn)引用：

• Deuis JR, Dvorakova LS, Vetter I. Methods Used to Evaluate Pain Behaviors in Rodents. Front Mol Neurosci. 2017 Sep 6;10:284. doi: 10.3389/fnmol.2017.00284. PMID: 28932184; PMCID: PMC5592204.

• Zumbusch AS, McEachern ELF, Morgan OB, Nickner E, Mogil JS. Normative Preclinical Algesiometry Data on the von Frey and Radiant Heat Paw-Withdrawal Tests: An Analysis of Data from More Than 8,000 Mice Over 20 Years. J Pain. 2024 Jul;25(7):104468. doi: 10.1016/j.jpain.2024.01.333. Epub 2024 Jan 12. PMID: 38219851.

• Liu X, Long F, Zou W, Qi T. Lactate alleviates trigeminal neuralgia symptoms in mice by suppressing neuroinflammation. J Int Med Res. 2025 May;53(5):3000605251341802. doi: 10.1177/03000605251341802. Epub 2025 May 25. PMID: 40415385; PMCID: PMC12117245.

• Yang J, Xie S, Guo J, Zhou Y, Yang Y, Sun Z, Cai P, Zhang C, Jiang S, Cao X, Fan Y, Chen X, Li X, Zhang Y. Restoration of mitochondrial function alleviates trigeminal neuropathic pain in mice. Free Radic Biol Med. 2025 Jan;226:185-198. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2024.11.011. Epub 2024 Nov 9. PMID: 39528053.

• Abdulrahim MW, Chen Y, Nair SK, Xu Q, Zhang Y, Das O, Gensler R, Feghali J, Ahmed AK, Jackson CM, Huang J, Comair YG, Bettegowda C, Dong X, Xu R. A mouse model of classical trigeminal neuralgia via intradural compression of the trigeminal nerve. bioRxiv [Preprint]. 2025 Nov 26:2025.11.24.690061. doi: 10.1101/2025.11.24.690061. PMID: 41357978; PMCID: PMC12676534.

• Tran, H., Sagi, V., Jarrett, S. et al. Diet and companionship modulate pain via a serotonergic mechanism. Sci Rep 11, 2330 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-81654-1

• Chen, C., Niehaus, J.K., Dinc, F. et al. Neural circuit basis of placebo pain relief. Nature 632, 1092–1100 (2024). https://doi.org/10.1038/s41586-024-07816-z

腦聲小店基于深度科研洞察，專注為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供"簡(jiǎn)器械·精實(shí)驗(yàn)"解決方案。我們突破高精設(shè)備局限，開發(fā)手工定制化儀器及配件，通過(guò)科研巧思將基礎(chǔ)工具轉(zhuǎn)化為創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)方案。產(chǎn)品涵蓋行為學(xué)裝置、操作輔助工具等，使實(shí)驗(yàn)室在保持操作簡(jiǎn)效的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)精細(xì)化數(shù)據(jù)采集，助力科研人員以創(chuàng)造性思維發(fā)掘簡(jiǎn)易儀器的潛在科研價(jià)值。