中藥復(fù)方-民族藥理2區(qū) | 上海中醫(yī)藥大學(xué)揭示脈絡(luò)寧抑制TGFβ/Smad介導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)生成減輕肝纖維化

【寫在前面】：本期推薦的是由上海中醫(yī)藥大學(xué)等研究團(tuán)隊(duì)合作近期發(fā)表于Journal of Ethnopharmacology(IF5.4）的一篇文章，揭示中藥脈絡(luò)寧通過抑制TGFβ/Smad介導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)生成減輕肝纖維化。

【期刊簡介】

【題目及作者信息】

背景：在中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論中，治療肝纖維化的主要原則包括清熱解毒、扶正補(bǔ)虛、活血化瘀。脈絡(luò)寧（MLN）是一種中藥復(fù)方制劑，由五味中草藥組成：金銀花、山銀花、玄參、石斛和牛膝。這些中藥具有協(xié)同增效的作用：金銀花、山銀花清熱解毒，石斛滋陰清熱，牛膝化瘀通絡(luò)，玄參清熱解毒、滋陰散結(jié)，基于其藥理活性，這些中藥被廣泛應(yīng)用于中國抗肝纖維化的復(fù)方制劑中，其協(xié)同作用使MLN成為相關(guān)的治療選擇。

目的： 評價(jià)MLN對肝纖維化的治療作用，探索其潛在機(jī)制并發(fā)現(xiàn)其潛在的活性化合物。

方法：使用CCl4或高脂飲食（HFD）和CCl4的組合建立小鼠肝纖維化模型。評估血清生化參數(shù)和肝臟組織學(xué)觀察以評估MLN的抗纖維化功效。通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析、RT-PCR和WB實(shí)驗(yàn)探究并驗(yàn)證關(guān)鍵的信號途徑。通過“配方分解”實(shí)驗(yàn)，以確定有助于MLN抗纖維化作用的主要中藥，并進(jìn)行分子對接和MST分析以發(fā)現(xiàn)活性化合物。

結(jié)果：MLN（13、40 g/kg）預(yù)防性或治療性給藥均能降低CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝組織膠原沉積和羥脯氨酸含量，降低血清透明質(zhì)酸（HA）和IV型膠原（Col IV）水平，同時(shí)抑制ECM合成相關(guān)基因的表達(dá)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，MLN的抗纖維化作用與調(diào)節(jié)ECM生成、血管生成和炎癥反應(yīng)有關(guān)，主要涉及HIF-1α、TGFβ和NFκB信號通路。拆方實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，玄參是MLN抗肝纖維化作用的主要活性藥物，但去除玄參后MLN的抗肝纖維化作用明顯減弱。此外，在HFD+CCl4模型中，MLN（13、40 g/kg）還可減少肝膠原沉積和血清HA和Col IV水平，并主要通過抑制TGFβ-Smad 2/3途徑抑制ECM產(chǎn)生。從玄參中提取的5個(gè)化合物安格洛苷C（AC）、哈巴俄苷（HPG）、桃葉珊瑚苷（Au）、獐牙菜苷（SWE）和京尼平苷酸（GPA）均能抑制TGFβ誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞（HSC）活化，AC和HPG與TGFβRⅡ或TGFβRⅠ的結(jié)合力較弱，AC能降低TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的mRNA的表達(dá)，而HPG和GPA在體外可降低TGFβRⅠ的mRNA的表達(dá)，MLN在體內(nèi)可降低肝組織TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的mRNA的表達(dá)。

結(jié)論：MLN主要通過抑制TGFβ信號通路抑制ECM的產(chǎn)生來減輕肝纖維化，玄參是MLN抗肝纖維化作用的主要成分，AC、HPG和GPA是MLN抗肝纖維化的關(guān)鍵活性成分。

圖文摘要

【前言】

肝纖維 化是各種慢性肝病創(chuàng)傷愈合反應(yīng)導(dǎo)致的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）在肝臟內(nèi)過度積聚的病理過程。在早期，肝纖維化在去除潛在的損傷刺激后是可逆的，但如果不及時(shí)治療，可能進(jìn)一步發(fā)展為不可逆的嚴(yán)重肝硬化。在全球范圍內(nèi)，晚期肝纖維化的患病率估計(jì)為3.3%，肝硬化為1.3%。每年大約1%-4%的肝硬化患者發(fā)展為肝細(xì)胞癌（HCC），其具有大約20%的5年存活率。因此，肝纖維化的有效管理具有高度的臨床重要性。

目前的治療策略集中在抑制ECM產(chǎn)生和促進(jìn)纖維化消退以防止肝纖維化進(jìn)展為肝硬化。肝纖維化的發(fā)病機(jī)制是復(fù)雜的，涉及多個(gè)相互關(guān)聯(lián)的生物學(xué)過程，如ECM的產(chǎn)生，血管生成和炎癥。其中，TGFβ與其受體結(jié)合形成復(fù)合物，誘導(dǎo)Smad2/3磷酸化和核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而促進(jìn)ECM合成相關(guān)基因的表達(dá)。膠原沉積典型地起始于門靜脈區(qū)，并逐漸延伸至整個(gè)肝臟，形成短纖維間隔。隨著纖維化的進(jìn)展，這些短纖維間隔連接相鄰的門 靜脈區(qū)，最終形成橋接纖維間隔。多個(gè)橋接間隔的相互連接隔離了單個(gè)肝小葉，損害從血液到肝細(xì)胞的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的輸送，并在纖維形成期間引發(fā)缺氧反應(yīng)。HIF-1α信號通路，上調(diào)血管生成相關(guān)基因的表達(dá)。然而，這種病理性血管生成通常是功能障礙，不能恢復(fù)足夠的氧和營養(yǎng)供應(yīng)，以糾正肝臟缺氧，但進(jìn)一步破壞了正常的組織結(jié)構(gòu)和加劇肝纖維化。此外，缺氧還與炎癥密切相關(guān)，NF-κB信號通路激活及其下游促炎性細(xì)胞因子的釋放，從而通過增強(qiáng)肝星狀細(xì)胞（HSC）的活化進(jìn)一步加重肝纖維化并引起組織損傷。因此，以ECM產(chǎn)生、血管生成和炎癥為靶點(diǎn)的治療策略對肝纖維化的治療具有很大的前景。

鑒于ECM沉積是肝纖維化的起始因素，通過抑制TGFβ-Smad2/3信號通路來減少ECM的產(chǎn)生已成為治療肝纖維化的主要方法。例如，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1（ECM 1），一種膠原蛋白中的糖蛋白，通過抑制血小板反應(yīng)蛋白或基質(zhì)金屬蛋白酶介導(dǎo)的潛在TGFβ的蛋白水解來維持TGFβ的未成熟形式，因此可作為TGFβ抑制劑減輕肝纖維化。類似地，轉(zhuǎn)錄中間因子1γ（TIF1γ），一種轉(zhuǎn)錄輔阻遏物，通過直接結(jié)合Smad2/3來抑制TGFβ誘導(dǎo)的膠原合成相關(guān)基因的表達(dá)，從而防止纖維化。開發(fā)有效的肝纖維化治療藥物是臨床上的迫切需求。這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)了靶向TGFβ-Smad2/3信號通路是開發(fā)抗纖維化藥物的 可行策略。

在傳統(tǒng)中醫(yī)理論的背景下，肝纖維化被分類為諸如腹部腫塊和肝郁的綜合征，其發(fā)病機(jī)理歸結(jié)為氣陰兩虛，瘀血阻絡(luò)，治療肝纖維化的基本原則是清熱解毒、補(bǔ)虛活血、化瘀。脈絡(luò)寧是由五味中藥組成的中藥復(fù)方，金銀花、山銀花、玄參、石斛和牛膝，具有清熱養(yǎng)陰、活血化瘀的功效，在國內(nèi)廣泛用于治療陰虛內(nèi)熱型和血栓閉塞性脈管炎、動(dòng)脈閉塞性脈管炎、靜脈血栓栓塞癥等血管瘀阻型。基于中醫(yī)理論，MLN是治療肝纖維化的潛在候選藥物，本研究旨在評價(jià)MLN抗肝纖維化的作用，闡明其作用機(jī)制，并篩選其潛在活性成分。

【結(jié)果部分】

1. 預(yù)防性和治療性給予MLN均減輕CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化。

2.使用轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析MLN發(fā)揮療效的重要信號通路。

3.MLN抑制TGFβ-Smad 2/3、NF-κB和HIF-1α信號通路。

4.玄參是MLN抗肝纖維化作用的主要成分。

5.MLN減輕HFD聯(lián)合CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化。

6.MLN抑制HFD聯(lián)合CCl4誘導(dǎo)的小鼠TGFβ-Smad2/3信號通路。

7.玄參中抑制TGFβ信號通路活性成分的篩選。

【結(jié)論與討論】

MLN具有抗肝纖維化的作用，其機(jī)制主要是通過抑制TGFβ-Smad 2/3信號通路抑制ECM的生成，玄參是MLN抗肝纖維化的主要成分，而AC、HPG和GPA可能是MLN抗肝纖維化的關(guān)鍵活性成分。

注：本文原創(chuàng)表明為原創(chuàng)編譯，非聲張版權(quán)，侵刪！

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