抗病毒+抗炎+止咳+退熱：連花清瘟協(xié)同機(jī)制首次被系統(tǒng)“拆解”！

基于傳統(tǒng)中醫(yī)理論并結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究成果研制的中藥復(fù)方制劑，因其兼具廣譜抗病毒、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用而備受關(guān)注。連花清瘟（LHQW）作為在多次重大疫情防控中廣泛應(yīng)用的代表性中藥復(fù)方，不僅在中國被納入多版國家診療方案，還在多項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)與基礎(chǔ)研究中驗(yàn)證了其多維度治療優(yōu)勢(shì)。

然而，復(fù)方中藥的多成分相互作用及其對(duì)整體藥效的貢獻(xiàn)機(jī)制仍未完全闡明，限制了其現(xiàn)代化與國際化推廣應(yīng)用。因此，從系統(tǒng)藥理和藥代-藥效結(jié)合的角度，深入解析LHQW的配伍科學(xué)性與協(xié)同機(jī)制，對(duì)于推動(dòng)中藥方劑機(jī)制研究及優(yōu)化其臨床應(yīng)用具有重要意義。

近日，Journal of Ethnopharmacology在線發(fā)表了一篇題為“Multi-dimensional PK-PD insights into Lianhua Qingwen's formula compatibility”的研究型論文，該研究通過拆方策略結(jié)合藥效學(xué)（PD）與藥代動(dòng)力學(xué)（PK）分析，闡明LHQW的功能定位與協(xié)同機(jī)制。結(jié)果顯示銀翹散(YQP)組分主導(dǎo)抗病毒與抗黏液效應(yīng)，麻杏石甘湯(MXSGD)介導(dǎo)鎮(zhèn)咳與解熱作用，大黃增強(qiáng)腸-肺軸保護(hù)功能；多組分協(xié)同產(chǎn)生抗炎效應(yīng)。PK分析表明，完整LHQW中特定成分的系統(tǒng)暴露量高于拆方組，且與PD效應(yīng)呈正相關(guān)。該研究為LHQW的組方設(shè)計(jì)提供了機(jī)制性證據(jù)，彰顯了融合古典醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代科學(xué)原理的學(xué)術(shù)價(jià)值。

LHQW的化學(xué)成分分析

該研究在前期工作（Chen et al., 2021）基礎(chǔ)上，通過優(yōu)化色譜–質(zhì)譜（LC–MS）條件，對(duì)連花清瘟（LHQW）的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分析，共鑒定出211種化合物，并建立了包含保留時(shí)間、HRMS、MS/MS碎片信息及分子式的成分?jǐn)?shù)據(jù)庫。

圖1. UPLC-HRMS分析LHQW的高分辨率TIC

其中143種結(jié)構(gòu)得到明確解析，52種經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)品確證。主要化合物類別包括黃酮類、蒽醌類、萜類、生物堿類、咖啡酰奎寧酸類、酚乙苷類、有機(jī)酸類及氰苷類。來源分析表明，這些成分主要來自金銀花（47種）、連翹（44種）、甘草（36種）、大黃（22種）、魚腥草（20種）及杏仁（11種）。該結(jié)果為闡明LHQW藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了重要化學(xué)數(shù)據(jù)。

圖2. 中藥中參比化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其來源

體外功效驗(yàn)證

為評(píng)估連花清瘟（LHQW）及其拆方（DPs）對(duì)甲型流感病毒H1N1的體外抗病毒活性，研究采用MDCK細(xì)胞檢測(cè)其細(xì)胞毒性與抑制效果。結(jié)果顯示，完整方抗病毒活性最強(qiáng)，依次為LHQW-M(不包括與MXSGD相關(guān)的草藥)、LHQW-D(不包括與YQP相關(guān)的草藥)和LHQW-Y(不包括大黃)。去除含銀翹片（YQP）相關(guān)藥材的LHQW-Y活性顯著下降，提示YQP成分對(duì)抗病毒作用具有關(guān)鍵貢獻(xiàn)。該結(jié)果系統(tǒng)闡明了關(guān)鍵成分對(duì)方劑抗病毒效力的貢獻(xiàn)。

為評(píng)估連花清瘟（LHQW）及其拆方（DPs）的抗炎作用，研究采用LPS刺激人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）建立體外炎癥模型。結(jié)果顯示，與模型組相比，所有處理組均顯著降低IL-1β和TNF-α水平，其中去除銀翹片（YQP）藥材的LHQW-Y組TNF-α下降幅度較小，提示YQP成分在抗炎中具有重要作用。系統(tǒng)分析表明，LHQW的多種主要成分具廣譜抗炎活性，其中YQP來源成分對(duì)TNF-α調(diào)節(jié)尤為顯著，可能解釋LHQW-Y組抗炎效力減弱的現(xiàn)象。

圖3. LHQW及其活性成分的體外藥效驗(yàn)證

黏液高分泌是呼吸系統(tǒng)疾病的重要病理特征。為評(píng)估連花清瘟（LHQW）及其拆方（DPs）對(duì)黏蛋白分泌的調(diào)控作用，采用CSE與LPS聯(lián)合刺激NCI-H292細(xì)胞建立體外黏液高分泌模型，并通過MUC5AC免疫熒光檢測(cè)驗(yàn)證模型的成功構(gòu)建。結(jié)果顯示，LHQW、LHQW-D及LHQW-M均顯著抑制MUC5AC表達(dá)，而去除銀翹片藥材的LHQW-Y組無明顯抑制作用，提示YQP來源成分在抑制黏液高分泌中具有關(guān)鍵作用。

體內(nèi)抗病毒功效驗(yàn)證

為驗(yàn)證連花清瘟（LHQW）及其拆方對(duì)病毒性肺炎的治療作用，研究構(gòu)建H1N1流感病毒鼻內(nèi)感染小鼠模型，并連續(xù)給藥5天。結(jié)果顯示，LHQW處理顯著減輕體重下降并降低肺指數(shù)，其療效優(yōu)于各拆方。LHQW及LHQW-D均顯著降低肺部病毒滴度（LVT），其中LHQW的抗病毒效果最強(qiáng)，依次為LHQW > LHQW-D > LHQW-M > LHQW-Y，LHQW-Y無明顯作用，YQP來源成分在其抗病毒作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用，體現(xiàn)了方劑配伍的科學(xué)性與多成分協(xié)同機(jī)制。

圖4. LHQW及其DPs對(duì)H1N1流感病毒感染小鼠肺炎的治療作用

LHQW通過直接抗炎作用和腸-肺軸調(diào)節(jié)改善LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷

為系統(tǒng)評(píng)價(jià)連花清瘟（LHQW）及其拆方（DPs）對(duì)LPS誘導(dǎo)急性肺損傷（ALI）小鼠的療效，研究建立綜合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停u(píng)估BALF炎癥因子、氣道纖毛運(yùn)動(dòng)、肺組織病理損傷及腸道相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示，LHQW顯著降低肺損傷評(píng)分和肺指數(shù)，抑制TNF-α、IL-6和IL-10升高，其抗炎效果優(yōu)于各拆方。纖毛搏動(dòng)頻率檢測(cè)表明，LHQW和LHQW-M可恢復(fù)纖毛功能，而LHQW-Y和LHQW-D無顯著改善。組織學(xué)分析顯示，LHQW在緩解炎細(xì)胞浸潤、肺泡結(jié)構(gòu)破壞、纖維化及黏液分泌方面效果最強(qiáng)。

圖5. LHQW及其DPs對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的ALI的治療作用

進(jìn)一步腸道分析發(fā)現(xiàn)，LHQW、LHQW-Y和LHQW-M均可改善LPS致腸道癥狀和絨毛損傷，LHQW-D療效最弱，提示大黃在腸道保護(hù)中作用關(guān)鍵。糞便16S rDNA測(cè)序結(jié)果表明，LHQW顯著提高腸道菌群多樣性，富集有益菌（如Bacteroidota、Barnesiella），抑制促炎菌（如Escherichia、Collinsella）；去除MXSGD或大黃均削弱這一調(diào)節(jié)作用。綜上，LHQW通過多重保護(hù)機(jī)制在ALI中表現(xiàn)出優(yōu)越療效。

圖6. LHQW及其DPs對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI患者腸道生態(tài)失調(diào)、腸道屏障損傷和微生物群組成的治療作用

鎮(zhèn)咳解熱療效評(píng)價(jià)

為評(píng)估連花清瘟（LHQW）及其活性成分的止咳與解熱作用，研究建立氨水誘咳小鼠模型與干酵母致熱大鼠模型。氨水模型中，LHQW、LHQW-Y、LHQW-D均顯著降低咳嗽頻率，而LHQW-M無顯著作用，提示止咳效應(yīng)主要依賴于麻杏石甘湯（MXSGD）相關(guān)成分。干酵母模型中，LHQW顯著降溫（降0.51 ℃），而LHQW-M與LHQW-D無效，表明MXSGD及大黃相關(guān)成分對(duì)退熱作用均不可或缺。

大鼠LHQW及其DPs的多組分定量分析

為研究連花清瘟（LHQW）及其拆方（DPs）體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征及重復(fù)給藥后成分暴露動(dòng)態(tài)變化，采用UPLC-MS/MS檢測(cè)大鼠血漿中46種成分。單次給藥后共檢測(cè)到11種主要暴露成分（麻黃堿、偽麻黃堿、苦杏仁苷、木犀草素苷、大黃素、大黃酸、去氧野靛苷、綠原酸、兒茶素、對(duì)香豆酸、桃葉苷），其AUC0–24h多數(shù)在完整方中顯著高于各拆方。連續(xù)7天給藥后，有8種成分（隱綠原酸、新綠原酸、槲皮素、木犀草苷苷、木犀草苷、木犀草素、沒食子酸及（R,S)-巰基葡萄苷）血漿濃度較單次顯著升高。

圖7. LHQW及其DPs的藥動(dòng)學(xué)研究

整體上，完整方組在等量生藥條件下的血藥水平普遍高于拆方，提示藥代“協(xié)同”更佳。進(jìn)一步分析顯示：①快速清除型（如偽麻黃堿、苦杏仁苷、大黃素、大黃酸、去氧野靛苷）——多次給藥AUC升幅<50%；②累積型（如綠原酸、新綠原酸）——多次給藥AUC升幅>100%。這種差異化暴露模式提示，LHQW的療效可能在治療不同階段依賴于具有不同藥代特性的活性成分。

圖8. 維度綜合藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)分析，證明了LHQW配方的科學(xué)原理

綜上，本研究通過多模型、多維度系統(tǒng)解析了連花清瘟（LHQW）及其主要配伍成分在抗病毒、抗炎、抑制黏液分泌、止咳、退熱等方面的協(xié)同作用機(jī)制，并揭示了不同來源成分在療效與藥代動(dòng)力學(xué)上的差異化貢獻(xiàn)。結(jié)果表明，完整方在改善病毒性肺炎、緩解氣道高分泌及炎癥損傷、減輕咳嗽與發(fā)熱等方面均優(yōu)于拆方，且表現(xiàn)出更佳的體內(nèi)藥代協(xié)同性與成分暴露優(yōu)勢(shì)。進(jìn)一步的成分溯源分析明確了特定藥對(duì)及代表性活性成分在不同作用環(huán)節(jié)的關(guān)鍵角色。這些發(fā)現(xiàn)不僅為闡明LHQW的方劑配伍科學(xué)性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為其在呼吸系統(tǒng)疾病防治中的精準(zhǔn)應(yīng)用和新型復(fù)方藥物的設(shè)計(jì)研發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，提示未來可結(jié)合藥代動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)化用藥策略，推動(dòng)中藥現(xiàn)代化與國際化發(fā)展。

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378874125009419

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