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      《Cell》論文精讀 | 林鴻宣院士團隊破解水稻高溫解碼新機制

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      關鍵詞:逆境生物|水稻耐熱機制|分子育種|MST

      研究背景

      全球變暖下的糧食安全挑戰

      全球氣候變暖已成為威脅全球糧食安全的核心因素之一,持續性高溫通過傷害作物花粉活力、抑制授粉抑制授粉過程與阻礙籽粒灌漿,顯著降低產量及品質,削弱主糧產區的生產潛能,已成為當下最嚴峻、最直接的糧食安全挑戰之一。因此,解析植物耐熱性的分子機制、挖掘關鍵耐熱基因,對培育適應未來氣候條件的新品種具有重要戰略意義。

      植物如何感知高溫信號并啟動適應性應答,是植物逆境生物學領域長期關注的重大科學問題。高溫脅迫會引發細胞膜組分改變,觸發“膜脂重塑”過程。然而,這一變化如何被細胞識別、轉導并最終解讀為生物學指令,一直是領域內長期未解之謎。

      研究內容

      近期,中國科學院分子植物科學卓越創新中心林鴻宣院士團隊與上海交通大學林尤舜研究員團隊、廣州國家實驗室李亦學研究員團隊合作在國際權威學術期刊《Cell》(IF:42.5)上發表題為“A stepwise decoding mechanism for heat sensing in plants connects lipid remodeling to a nuclear signaling cascade”的研究論文。該成果破解了水稻感知并響應高溫的雙重密碼,系統闡明了從細胞膜脂質重塑到核內基因表達調控協同串聯的完整熱信號解碼通路,在模擬高溫的田間試驗中實現產量顯著提升,進一步為創制梯度耐熱性的水稻新種質提供了寶貴的基因資源,為應對全球氣候變暖帶來的糧食安全挑戰提供了全新的分子解決方案。


      在前期發現耐熱負調控因子TT2

      Nature Plants, 2022
      )的基礎上,研究團隊整合時間序列轉錄組與脂質代謝組分析,成功鑒定到一個快速響應高溫的二酰甘油激酶(DGK7)。該酶在高溫誘導下被特異性激活,催化生成第二信使分子磷脂酸(PA),實現物理信號向脂質信號的第一步轉換。進一步研究顯示,G蛋白亞基TT2/RGB1通過直接相互作用,抑制DGK7第477位絲氨酸的磷酸化修飾,負向調控該信號轉換過程。

      為解析PA信號的后續傳遞機制,研究團隊通過功能域篩選,鑒定到一個具有PA結合域和磷酸二酯酶催化域的雙功能蛋白MdPDE1。該蛋白能夠感知PA濃度變化,與PA結合并被激活,轉移到細胞核中,通過水解環磷酸腺苷(cAMP)降低核內cAMP水平,完成脂質信號向環核苷酸信號的第二步轉換。點突變實驗證實,MdPDE1的PA結合能力是其核定位與功能執行的關鍵。最終,核內cAMP水平的下降觸發轉錄重編程,上調小熱激蛋白和活性氧清除酶等相關基因的表達,從而在細胞層面建立起一套完整的耐熱響應機制,顯著增強水稻的高溫耐受能力(圖1)。“G蛋白–DGK7–PA–MdPDE1–cAMP”信號途徑的完整解析,系統闡明植物從細胞膜感知到核內基因表達調控的熱信號全程解碼機制,為理解植物逆境響應機制提供了全新的分子框架。


      圖1. 熱信號轉換的分步解碼機制模型

      機制上的突破也為育種提供了精準靶點。研究團隊通過對DGK7與MdPDE1進行定向遺傳改良,在模擬高溫的田間試驗中取得了顯著成效:單基因改良的水稻株系比對照株系增產50%-60%;而TT2協同DGK7的雙基因改良株系比對照株系產量提升約一倍、米質改良明顯,且正常條件下對產量性狀無負效應(圖2)。這些結果表明,基于該通路的精準育種設計可實現耐熱表型的梯度化調控,為水稻、小麥、玉米等主糧作物應對不同強度的高溫脅迫提供了靈活的定制化解決方案,從而為育種家培育“高產高抗”作物新品種提供重要的理論依據和基因資源。


      圖2. 精準設計梯度耐熱水稻實現高溫穩產

      研究亮點

      該研究首次建立了植物細胞通過G蛋白信號、脂質信號cAMP信號的精細協調來感知、解碼并響應環境熱信號的完整機制。這是一個環環相扣、層層解碼地將物理熱信號轉化為生物信號,并從細胞膜精準傳遞到細胞核的耐熱調控通路。該研究中鑒定到的MdPDE1是水稻中首例被報道的磷酸二酯酶,同樣也是植物中首例接收脂質信號并實現空間位移的磷酸二酯酶。同時,該研究也進一步通過田間試驗證明了該機制在農業生產實踐中的應用潛力,為育種家提供了根據需要定制耐熱作物的關鍵基因資源。

      MST技術提供關鍵互作定量“證據鏈”

      在探究MdPDE1中與PA結合的特異性氨基酸殘基這一關鍵環節中,研究團隊面臨脂質-蛋白質相互作用檢測的技術挑戰。脂質分子在水相中難以形成穩定均一的體系,傳統方法難以獲得可靠的定量結合數據。

      因此,團隊選擇利用德國NanoTemper公司的分子互作平臺Monolith進行的微量熱泳動(MST)實驗,成功實現了量化分析MdPDE1與PA結合強度的檢測,并證實了所發現的兩個結合結構域的重要性(圖2E)。脂質與蛋白質結合的測定中,穩定可靠的檢測體系是重要的難題,MST技術兼容性強,無需固定、充分兼容脂質體、囊泡、膠束等模擬生物膜模型,并且兼容一定濃度的去垢劑體系,為脂質分子形成穩定均勻的液相體系提供了基礎,成為破解此類“難測互作”的理想工具,為該研究獲取MdPDE1與PA結合的詳實量化數據提供了助力。


      圖2. PA結合是MdPDE1活性和核易位所必需的(原文Figure 6)


      Monolith X分子互作平臺

      產品咨詢

      「 輕松、快速、精準檢測分子間相互作用 」

      ? 技術模塊:MST+TRIC+SpS,可靈活升級

      ? 無需固定樣品:可直接在溶液中定量檢測

      ? 無懼分子量:各種分子互作輕松駕馭

      ? 省時省樣:1.5min/Kd, 4-10μL樣本消耗

      ? 智能優化:實時監測并提供樣本優化建議

      ? 無液流系統:無堵塞風險,免維護

      來自研究團隊的評價

      在本研究中,團隊利用MST技術順利實現了對PA與MdPDE1結合強度的定量分析,并驗證了其特定功能結構域的關鍵作用。該技術能完全在溶液相中精確測量分子間的結合親和力(Kd值),無需固定樣本,最大程度還原了體內真實的互作環境。其卓越的靈敏度(檢測范圍橫跨pM至mM并驗證了其特定功能結構域的關鍵作用)使其能夠精準捕獲弱相互作用,并對脂質體等復雜體系表現出優異的兼容性,因而成為研究蛋白質-脂質互作理想工具。配合該技術研發的MO.Affinity Analysis軟件則為數據解析提供了高效、可靠的解決方案。

      值得一提的是,在實驗設計與優化過程中,NanoTemper公司應用專家與本單位公共技術平臺負責人劉莉老師通力合作,為方案優化提供了全面可行的建議,為作者得到準確詳實的實驗結果提供了充分支持。NanoTemper憑借專業、可靠且領先的技術和服務獲得了業內許多科研人員的信賴。

      研究團隊及課題組介紹

      林鴻宣院士團隊主要從事水稻重要復雜性狀遺傳調控機制和功能基因組學研究。成功克隆了水稻耐鹽調控重要基因SKC1

      、DS
      T
      等;水稻耐熱調控重要基因 TT1、TT2、TT3 以及耐熱耐堿基因 ATT1/2 等,相關成果發表在 Cell、Nature、Science、Nature Genetics和Nature Plants 等國際權威學術期刊上;獲國家自然科學獎二等獎、上海市自然科學獎一等獎、何梁何利獎、談家楨生命科學成就獎等。


      闞義

      闞義,中共黨員,博士后,主要研究方向為水稻耐熱QTL基因的定位克隆與分子機制的研究。以第一作者身份在Cell、Nature Plants、Molecular Plant等期刊發表論文4篇,申請發明專利4項,相關成果入選“2022年全國生命科學十大研究進展”。


      穆曉瑞

      穆曉瑞,中共黨員,博士研究生,主要研究方向為水稻耐熱基因挖掘及耐熱分子機制的研究。曾作為第一作者或主要作者在Cell、Nature Plants、Molecular Plant雜志上發表文章,申請發明專利3項。曾獲2021年中國科學院大學三好學生稱號及2025年博士生國家獎學金。

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